本文關(guān)鍵詞：白細胞介素33（IL-33）在腫瘤組織的表達及其抗腫瘤作用的初步研究

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【摘要】：【目的】分析非小細胞肺癌和乳腺癌患者腫瘤組織和癌旁組織IL-33分子m RNA的表達;建立分泌小鼠IL-33的基因轉(zhuǎn)染細胞株,研究其特性并初步探討分泌于腫瘤微環(huán)境中的IL-33的抗腫瘤作用�！痉椒ā恳耘R床病理確診為非小細胞肺癌患者并手術(shù)切除的腫瘤及癌旁遠端組織共33對組織為研究對象,采用傳統(tǒng)的Trizol法提取組織中總m RNA,逆轉(zhuǎn)錄成c DNA之后通過實時熒光定量PCR(q PCR)方法檢測癌組織與癌旁組織中IL-33m RNA的表達水平;通過GEO數(shù)據(jù)庫中檢索關(guān)于IL-33分子在乳腺癌中表達的數(shù)據(jù);構(gòu)建含有人CD8?信號肽基因序列的IL-33融合基因,經(jīng)Bam H I和Eco R I雙酶切后插入p CDEF3真核表達載體構(gòu)建成為p CDEF3-IL-33重組子,脂質(zhì)體法以重組質(zhì)粒p CDEF3-IL-33和空質(zhì)粒p CDEF3分別轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌細胞株4T1,經(jīng)G418長期加壓篩選后,酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測基因轉(zhuǎn)染細胞株培養(yǎng)上清中小鼠IL-33的分泌;采用活細胞計數(shù)和CFSE摻入法檢測基因轉(zhuǎn)染細胞生長與增殖的均一性;經(jīng)ELISA法檢測IL-33對效應(yīng)性CD8+T細胞IFN-?分泌的促進作用;將細胞株4T1-vec和4T1-IL-33注入小鼠乳腺脂肪層,構(gòu)建荷瘤小鼠模型,監(jiān)測腫瘤生長大小,第30天處死小鼠觀察其肺轉(zhuǎn)移的情況。【結(jié)果】經(jīng)q PCR檢測,統(tǒng)計學(xué)分析顯示IL-33在非小細胞肺癌癌旁遠端組織的表達高于肺癌組織的表達量(P=0.01);基于GEO數(shù)據(jù)庫的乳腺癌組織數(shù)據(jù)分析顯示,IL-33在乳腺正常組織中的表達高于乳腺癌組織;基因轉(zhuǎn)染細胞4T1-p CDEF3-IL-33能穩(wěn)定分泌小鼠IL-33分子,與4T1及轉(zhuǎn)染了空質(zhì)粒的4T1-vec細胞相比,其生長和增殖無差異(P0.05);體外刺激試驗表明,IL-33能顯著地促進效應(yīng)性CD8+T細胞IFN-?的分泌(P0.05);體內(nèi)實驗研究初步表明,4T1-IL-33細胞株在腫瘤微環(huán)境中分泌的IL-33能較為顯著地抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移(P0.05)。【結(jié)論】IL-33 m RNA在腫瘤組織中的表達較正常組織低,提示IL-33可能對腫瘤的生長起一定的抑制作用;建立了能穩(wěn)定分泌小鼠IL-33的基因轉(zhuǎn)染細胞株,其分泌于微環(huán)境中的IL-33對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移具有顯著的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36

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本文編號：1301938