本文關(guān)鍵詞：腎上腺皮質(zhì)癌中新型分子靶點(diǎn)的篩選及其意義

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【摘要】：目的:腎上腺皮質(zhì)癌(adrenocortical carcinoma,ACC)是一種較少見的腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞來源的具有內(nèi)分泌功能的惡性腫瘤,該腫瘤預(yù)后普遍不佳。而腫瘤相關(guān)性血管生成與腫瘤進(jìn)展過程密切相關(guān),并且參與了腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種具有高效能的促血管形成的糖蛋白,其在重塑細(xì)胞外基質(zhì)、生成炎癥因子、生成造血干細(xì)胞等方面發(fā)揮相當(dāng)重要的作用,進(jìn)而與內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)增殖以及遷移等行為具有相關(guān)性。而類固醇生成因子1(steroidogenic factor-1,SF-1)是一種核受體轉(zhuǎn)錄因子,可通過與血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)的相互作用,進(jìn)而與酪氨酸激酶受體Tie2間接發(fā)生功能上的連接,后者可調(diào)節(jié)VEGF的功能,從而調(diào)整新生血管形成的全過程。我們通過翻閱各種不同的文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)上述兩種指標(biāo)在腎上腺皮質(zhì)癌中研究并不多,本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)及形態(tài)學(xué)定量分析,對(duì)良性腎上腺皮質(zhì)腺瘤以及ACC患者腫瘤標(biāo)本中上述兩者的染色情況進(jìn)行分析,同時(shí)采用CD34特異性標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞,從而檢測(cè)微血管密度(microvessel density,MVD)的染色情況,同時(shí)結(jié)合既往病歷資料,從而探討VEGF、SF-1在腎上腺腫瘤進(jìn)展及新生血管生成過程中的意義。方法:1、選取住院時(shí)間處于1990年5月-2012年7月,在上海瑞金醫(yī)院手術(shù)切除腫瘤,同時(shí)具有完整臨床、病理數(shù)據(jù)的腎上腺皮質(zhì)腫瘤石蠟標(biāo)本共52例。將其依據(jù)腫瘤性質(zhì)分為腎上腺皮質(zhì)腺瘤組(良性組)25例,腎上腺皮質(zhì)癌組(惡性組)27例。2、采用免疫組化技術(shù),對(duì)良、惡性組中SF-1、VEGF相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)與分析。并采用半定量積分計(jì)數(shù)法對(duì)腫瘤性質(zhì)進(jìn)行加權(quán)評(píng)分。對(duì)細(xì)胞染色特征的判定主要來源于細(xì)胞內(nèi)的染色顆粒情況與陽性染色所占比例兩種指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)。兩者之和處于0-2分之間判定為染色陰性(-),3分為一般陽性(+),4分為中度陽性(++),5-6分為染色強(qiáng)陽性(+++)。腫瘤內(nèi)MVD計(jì)數(shù):首先在低倍物鏡(x40)下隨機(jī)選取高血管密度區(qū),隨后在高倍鏡(x400)下隨機(jī)選用并計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)被CD34陽性染色的血管數(shù),分析并計(jì)算上述的平均值作為MVD值(微血管數(shù)/視野)。3、分析并對(duì)比良、惡性組間SF-1、VEGF指標(biāo)的表達(dá)情況及MVD的區(qū)別。結(jié)果:1、SF-1在ACC組中呈高表達(dá)(20/27,74.07%),在良性腎上腺腺瘤組表達(dá)低(7/25,28.00%),兩組之間SF-1的表達(dá)率有顯著性差別(P0.05)。VEGF在ACC組中呈高表達(dá)(19/27,70.37%),在良性組中表達(dá)較低(8/25,32.00%),VEGF在兩組之間的表達(dá)情況有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、微血管密度(MVD)在ACC組中的表達(dá)為(69.22±22.56)/視野,良性組中為(27.76±12.75)/視野,兩者之間有顯著性差異(P0.05)2、3、Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果提示,SF-1的表達(dá)和MVD呈正相關(guān)(r,s=0.856,P0.0001),VEGF的表達(dá)和MVD呈正相關(guān)(r,s=0.764,P0.0001),提示在ACC患者的腫瘤新生血管形成的過程中可能涉及了SF-1、VEGF的作用。結(jié)論:腎上腺皮質(zhì)癌組織中SF-1、VEGF的表達(dá)要高于良性腎上腺皮質(zhì)腺瘤,同時(shí)SF-1、VEGF的表達(dá)情況分別與MVD有一定的正相關(guān),提示上述兩種指標(biāo)均可能與ACC腫瘤相關(guān)血管形成有關(guān)。目的:通過構(gòu)建特定的小干擾RNA特異性沉默胰島素類似物生長(zhǎng)因子1受體(IGF1R)基因,檢測(cè)人類腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞株SW13增殖及凋亡在受體沉默后的變化情況,探討IGF1R在腎上腺皮質(zhì)癌中的意義,從而為人類腎上腺皮質(zhì)癌的靶向治療提供依據(jù)。方法:使用免疫熒光技術(shù)對(duì)人類腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系SW13中IGF1R蛋白的表達(dá)進(jìn)行定性分析。同時(shí)依據(jù)人類IGF1R的c DNA序列合成其蛋白特異性Si RNA,通過脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染SW13細(xì)胞,從而特異性沉默IGF1R基因,然后在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)后通過實(shí)時(shí)定量Realtime PCR檢測(cè)Si RNA對(duì)靶基因m RNA的沉默作用,并且使用western blot檢測(cè)其靶蛋白的表達(dá)情況,分析Si RNA對(duì)IGF1R的沉默效率。篩選出干擾效率最高的Si RNA,再通過MTT法測(cè)定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡狀態(tài),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1、免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞SW13中可見IGF1R的陽性表達(dá);2、3種不同的針對(duì)IGF1R的Si RNA序列均能夠有效下調(diào)SW13細(xì)胞IGF1R m RNA水平,而通過western blot檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)在蛋白水平出現(xiàn)IGF1R蛋白的表達(dá)減低。從中篩選出沉默效率最高的Si RNA-2403;3、使用Si RNA-2403特異性沉默IGF1R基因,能夠有效抑制SW13細(xì)胞增殖以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:IGF1R基因沉默能夠誘導(dǎo)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞凋亡,抑制其增殖過程,提示IGF1R在促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)癌腫瘤生長(zhǎng)中起著重要作用,有望成為ACC靶向治療的新的位點(diǎn),同時(shí)為腫瘤靶向治療在ACC中應(yīng)用提供相應(yīng)的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R736.6

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宿恒川;黃欣;戴軍;周文龍;黃寶星;曹萬里;沈周俊;孫�？�;;PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路在腎上腺皮質(zhì)癌組織的表達(dá)特點(diǎn)[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2014年02期

2 Helen X. Chen;Elad Sharon;;IGF-1R as an anti-cancer target—trials and tribulations[J];Chinese Journal of Cancer;2013年05期

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本文編號(hào)：1299167