本文關(guān)鍵詞：E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞特性研究

  更多相關(guān)文章： 膀胱癌 E-鈣黏蛋白 N-鈣黏蛋白 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：研究背景膀胱癌是人類最常見惡性腫瘤之一,占全部惡性腫瘤的3.2%,其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,而膀胱癌也是泌尿系腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一。美國癌癥協(xié)會統(tǒng)計,在2006年膀胱癌在美國男性惡性腫瘤中排名第四位,在女性惡性腫瘤中排名地九位。在我國泌尿系腫瘤中,膀胱癌的發(fā)生率和病死率也處于首位。膀胱癌包括多種病理類型,其中最常見的是膀胱移行細(xì)胞癌。膀胱癌可以分為非肌層浸潤性膀胱癌和肌層浸潤性膀胱癌。浸潤和轉(zhuǎn)移是膀胱癌的主要生物學(xué)特性。研究膀胱癌的浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制將有助于進(jìn)一步的了解認(rèn)識膀胱腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程,這將對膀胱移行細(xì)胞癌的治療和預(yù)后提供更多更重要的理論基礎(chǔ)。目前對膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)取得重大的進(jìn)展,對膀胱移行細(xì)胞癌的診斷和治療也取得重大的發(fā)展。然而浸潤和轉(zhuǎn)移依然是癌癥治療的難點,也是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。研究表明上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。因此進(jìn)一步的探討學(xué)習(xí)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程有利于進(jìn)一步的研究認(rèn)識膀胱癌的進(jìn)展過程,有利于指導(dǎo)膀胱癌的預(yù)防和治療。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指來源于上皮的腫瘤細(xì)胞,在特定的病理和生理情況下失去極性并向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的生物學(xué)過程,主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞粘附減少,上皮細(xì)胞極性的消失,使細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng),同時細(xì)胞表型發(fā)生改變,獲得了間質(zhì)細(xì)胞表型。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是來源于上皮的惡性腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移能力的重要生物學(xué)過程。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和N-鈣黏蛋白(N-cadherin)分別是上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的分子生物標(biāo)志物,都是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子標(biāo)志物。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程,簡單的說就是E-鈣黏蛋白表達(dá)逐漸減少,而N-鈣黏蛋白表達(dá)逐漸增加的過程。目前認(rèn)為,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著及其重要的作用。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生發(fā)展是一個多基因、多步驟、多階段的復(fù)雜的過程。大量的研究已經(jīng)顯示了E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用,及其與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究也取得了重大的進(jìn)展,然而很少有文章報道對E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白的雙陰性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞特性的研究及推測其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系。曾經(jīng)有文章報道在檢測E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白在非肌層浸潤性膀胱癌的組織標(biāo)本中的表達(dá)情況時,可檢測到有E-鈣黏蛋白陰性表達(dá)和N-鈣黏蛋白陰性表達(dá)的現(xiàn)象存在,然而并未明確指出有E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的癌細(xì)胞存在及對其特性進(jìn)行研究,也并未探討其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系。因此我們猜想：是否來源于上皮的膀胱移行細(xì)胞癌組織中都有E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的癌細(xì)胞存在呢?而這樣一種膀胱癌細(xì)胞它的生物學(xué)特性又是這么樣的呢?與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有沒有關(guān)系呢?在本課題中,我們著重研究了E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性,并探討其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系,進(jìn)一步深化了解上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生發(fā)展過程,加深了對膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程的了解。目的：1、檢測證實膀胱移行細(xì)胞癌組織中有E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的癌細(xì)胞存在。2、探討E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。3、推測E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的現(xiàn)象與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系。方法：1、用組織免疫熒光實驗檢測E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)。2、用免疫蛋白印跡實驗(western blotting)和細(xì)胞免疫熒光實驗(immunofluorescence assay)分別檢測E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白在膀胱尿路上皮癌細(xì)胞株(5637細(xì)胞株,UMUC-3細(xì)胞株,EJ細(xì)胞株)中的表達(dá)情況。3、細(xì)胞功能特性比較：用細(xì)胞增殖實驗(CCK8)檢測三株膀胱尿路上皮癌細(xì)胞(5637細(xì)胞株,UMUC-3細(xì)胞株,EJ細(xì)胞株)體外增殖能力；用平板克隆形成實驗檢測癌細(xì)胞克隆形成能力；用Transwell實驗分別檢測癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力；用動物實驗檢測癌細(xì)胞在免疫缺陷小鼠皮下成瘤能力。結(jié)果：1、E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)組織免疫熒光結(jié)果顯示在低級別、中級別和高級別肌層浸潤性膀胱移行細(xì)胞癌組織中均檢測到E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的細(xì)胞存在。其中紅色熒光代表E-鈣黏蛋白的表達(dá),綠色熒光代表N-鈣黏蛋白表達(dá),藍(lán)色熒光代表細(xì)胞核。2、E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白在膀胱尿路上皮癌細(xì)胞株(5637細(xì)胞,UMUC-3細(xì)胞,EJ細(xì)胞)中的表達(dá)免疫蛋白印跡實驗和細(xì)胞免疫熒光實驗結(jié)果共同顯示5637細(xì)胞株為E-鈣黏蛋白陽性表達(dá)和N-鈣黏蛋白陰性表達(dá)；UMUC-3細(xì)胞株為E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)；EJ細(xì)胞株為E-鈣黏蛋白陰性表達(dá)和N-鈣黏蛋白陽性表達(dá)。3、細(xì)胞功能特性比較(1)、體外增殖實驗結(jié)果表明,5637細(xì)胞、UMUC-3細(xì)胞及EJ細(xì)胞三組間相比較細(xì)胞間的體外增殖能力差異顯著(F=308.583；P0.01)；不同時間點對細(xì)胞體外增殖能力的影響差異具有顯著性(F=1513.910；P0.01)；各組細(xì)胞與各時間組兩因素之間交互效應(yīng)顯著(F=58.889；P0.01)。除了第一天(F=0.553,；P=0.602)、第二天(F=1.078；P=0.398)外,其他各時間點細(xì)胞組間的細(xì)胞增殖差異具有顯著性。體外增殖實驗結(jié)果顯示UMUC-3細(xì)胞的體外增殖能力強(qiáng)于5637細(xì)胞,兩者差異顯著(P0.05),但是弱于EJ細(xì)胞,兩者差異顯著(P0.05)。(2)、平板克隆形成實驗結(jié)果顯示5637、UMUC-3與EJ細(xì)胞株間克隆形成能力差異顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=203.304, P0.01); UMUC-3細(xì)胞比5637細(xì)胞能夠形成更大更多的克隆球(5637細(xì)胞組克隆形成率為5%,UMUC-3細(xì)胞組克隆形成率為15.38%,P0.05),然而與EJ細(xì)胞相比較,所形成的克隆球較小、數(shù)量較少(UMUC-3細(xì)胞組克隆形成率為15.38%,EJ細(xì)胞組克隆形成率為24.25%,P0.05)；(3)、Transwell遷移實驗結(jié)果顯示5637、UMUC-3與EJ細(xì)胞株間細(xì)胞遷移能力差異顯著,差異間有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1523.776,P0.01)；UMUC-3細(xì)胞的遷移能力顯著強(qiáng)于5637細(xì)胞,差異顯著(P0.05),然而弱于EJ細(xì)胞,差異顯著(P0.05)；(4)、Transwell侵襲實驗結(jié)果也顯示5637、UMUC-3與EJ細(xì)胞株間細(xì)胞侵襲能力差異顯著,差異間有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2161.376,P0.01)；UMUC-3細(xì)胞的侵襲能力顯著強(qiáng)于5637細(xì)胞,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與EJ細(xì)胞相比較,明顯弱于EJ細(xì)胞,兩者差異顯著(P0.05)；(5)、裸鼠皮下移植瘤實驗結(jié)果顯示：三組細(xì)胞(5637、UMUC-3及EJ細(xì)胞)在7個時間點的皮下瘤體積的總體差異有顯著性(F=23.903；P0.01)；每組細(xì)胞皮下瘤體積隨著時間的增長而逐漸增大,在時間水平細(xì)胞之間的皮下腫瘤體積總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=16.295；P0.01)；且細(xì)胞與天數(shù)之間的交互效應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.372；P0.01)。5637細(xì)胞皮下成瘤數(shù)目比較少,成瘤速度比較慢,腫瘤體積也比較小,隨著時間推移5637細(xì)胞組皮下腫瘤體積變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.292；P=0.138)。而UMUC-3細(xì)胞及EJ細(xì)胞皮下成瘤能力都比較強(qiáng),隨著時間的增長UMUC-3細(xì)胞組皮下瘤體積變化差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=12.210；P0.01),且隨著時間變化EJ細(xì)胞組皮下瘤體積大小變化也有統(tǒng)計學(xué)意義(F=11.348；P0.01),其中EJ細(xì)胞皮下瘤生長能力最強(qiáng)。兩兩比較的結(jié)果顯示：從第12天開始,不同細(xì)胞組間裸鼠皮下瘤生長能力開始出現(xiàn)顯著差異(P0.05)。皮下瘤實驗結(jié)果表明：UMUC-3細(xì)胞組皮下成瘤能力強(qiáng)于5637細(xì)胞組,但是弱于EJ細(xì)胞組。病理組織切片HE染色結(jié)果顯示組織形態(tài)學(xué)與腫瘤形態(tài)學(xué)相似。結(jié)論：1、在膀胱移行細(xì)胞癌組織中有E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的癌細(xì)胞存在。2、E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性強(qiáng)于E-鈣黏蛋白陽性表達(dá)和N-鈣黏蛋白陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌的細(xì)胞,但是弱于E-鈣黏蛋白陰性表達(dá)和N-鈣黏蛋白陽性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。3、E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的現(xiàn)像有可能參與膀胱移行細(xì)胞癌病理機(jī)制中的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。本研究的創(chuàng)新之處：1、進(jìn)一步指出膀胱移行細(xì)胞癌中有E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的癌細(xì)胞存在；2、探討了E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。3、推測了膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白雙陰性表達(dá)的狀態(tài)與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間是否存在關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 唐松喜;曹林升;周輝良;薛學(xué)義;林曦;羅義麒;;錯配修復(fù)基因hMSH2表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌預(yù)后關(guān)系的研究[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2014年03期

2 祝麗雙;王浩;陳佳;劉暢;陸慧琪;韓煥興;;布洛芬抑制人NSCLC細(xì)胞株NCI-H460和乳腺癌細(xì)胞株SKBR3增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制探討[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年12期

3 劉敏;毛向明;薛義軍;鄒曉峰;袁源湖;肖日海;張國璽;伍耿青;王曉寧;;CD147在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年34期

4 劉yN;陳先國;梁朝朝;;前列腺癌腫瘤組織中E-cadherin和N-cadherin的表達(dá)及意義[J];中華男科學(xué)雜志;2014年09期

5 梁勝杰;鄒青松;韓邦e，

本文編號：1296674