本文關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌中LHX2基因異常表達(dá)的microRNA調(diào)控機制

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【摘要】：背景與目的:肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的癌癥,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)幾乎占85%以上。LHX2屬于LIM蛋白家族,現(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn),LHX2能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但具有的作用機制還不是很清楚。microRNA對基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用是通過與特定靶基因3’UTR種子序列的完全或不完全互補配來實現(xiàn)的。研究表明在癌癥的發(fā)生和發(fā)展中檢測到了microRNAs表達(dá)的改變。預(yù)測顯示多個microRNAs可以靶向LHX2的3’UTR區(qū)域。本研究旨在探討NSCLC中LHX2表達(dá)的microRNA調(diào)控機制,為NSCLC的早期診斷和治療提供確鑿的實驗依據(jù)。方法:(1)Real-Time PCR和Western Blot方法分別檢測在人正常支氣管細(xì)胞HBE和4株NSCLC細(xì)胞中LHX2基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平以及50對NSCLC組織樣本中LHX2基因的mRNA表達(dá)水平。(2)將si-LHX2-1和si-LHX2-2轉(zhuǎn)染至NSCLC細(xì)胞株A549和LTEP-α-2中,通過CCK-8和細(xì)胞集落形成方法觀察細(xì)胞的增殖情況,驗證LHX2對細(xì)胞增殖的作用。(3)生物信息學(xué)軟件預(yù)測分析能夠靶向LHX2 3’UTR區(qū)域的microRNAs,我們篩選到miR-1238。首先運用雙熒光素酶活性檢測實驗驗證miR-1238是否與LHX2 3’UTR區(qū)域的種子序列直接結(jié)合,驗證miR-1238對LHX2的靶向作用。然后合成miR-1238 mimics瞬時轉(zhuǎn)染A549和LTEP-α-2細(xì)胞,檢測轉(zhuǎn)染前后LHX2 mRNA和蛋白表達(dá)變化,(4)Real-Time PCR方法分別檢測在人正常支氣管細(xì)胞HBE和4株NSCLC細(xì)胞以及50對NSCLC組織樣本中miR-1238表達(dá)水平,并將其和LHX2的表達(dá)作回歸分析,統(tǒng)計出NSCLC中LHX2和miR-1238表達(dá)的相關(guān)性。(5)將mi R-1238的模擬體mimics轉(zhuǎn)染至NSCLC細(xì)胞株A549和LTEP-α-2中,通過CCK-8和細(xì)胞集落形成方法觀察細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果:(1)a、與HBE相比,LHX2 mRNA和蛋白在NSCLC細(xì)胞株A549、LTEP-a-2、H460和H1299中的表達(dá)均是上升的。b、在50例NSCLC組織樣本中LHX2 mRNA表達(dá)上調(diào)(p0.05)。綜上所述,LHX2基因在NSCLC中的表達(dá)是上升的。(2)通過CCK-8和集落形成實驗可知,干擾LHX2基因后,NSCLC細(xì)胞株的增殖是受到抑制的,因此,LHX2基因能夠促進(jìn)NSCLC細(xì)胞株生長。(3)Dual Luciferase Reporter Assay實驗可知miR-1238可以結(jié)合在LHX2基因的3’UTR區(qū)。NSCLC細(xì)胞株A549和LTEP-α-2瞬時轉(zhuǎn)染miR-1238模擬體mimics,LHX2基因的mRNA和蛋白表達(dá)都下降。因此miR-1238下調(diào)LHX2基因的mRNA和蛋白表達(dá)并且這種作用是通過mi R-1238與LHX2基因的3’UTR種子序列直接結(jié)合引起的。(4)與HBE相比,在NSCLC細(xì)胞株A549、LTEP-a-2、H1299和H460中miR-1238的表達(dá)是下調(diào)的。在49例NSCLC組織樣本中miR-1238的表達(dá)也是下降的。也就是說,在NSCLC中miR-1238是低表達(dá)的。將其和LHX2的表達(dá)作回歸分析發(fā)現(xiàn)NSCLC中兩者的表達(dá)之間是負(fù)相關(guān)的。(5)通過CCK-8和集落形成實驗可知,miR-1238抑制NSCLC細(xì)胞株的增殖。結(jié)論:NSCLC細(xì)胞中,miR-1238低表達(dá),LHX2高表達(dá),并且miR-1238能夠直接靶向LHX2的3’UTR種子序列。在50對肺癌組織中,同樣是miR-1238低表達(dá)和LHX2基因高表達(dá),并且呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。對mi R-1238和LHX2基因功能分析可知,miR-1238能夠抑制腫瘤的生長,LHX2促進(jìn)腫瘤的生長,過表達(dá)miR-1238能夠下調(diào)LHX2 m RNA和蛋白的表達(dá)量。因此,miR-1238可能是一種抑癌基因,在肺癌的發(fā)生發(fā)展中,通過抑制LHX2基因的表達(dá)來抑制腫瘤的生長。通過研究miR-1238對LHX2基因的抑制作用可能會有助于提高我們對NSCLC的致病機制的了解,進(jìn)而對NSCLC的診斷和治療提供可靠的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：1294025