本文關(guān)鍵詞：炎癥調(diào)控因子GSK-3β在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及預(yù)后研究

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【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)主要研究GSK3β及STAT3在食管鱗癌中的表達(dá)情況,探討其與食管鱗癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系;檢測(cè)GSK3β及STAT3抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖、遷移能力及裸鼠成瘤能力的影響,分析GSK-3β與STAT3兩者之間的潛在調(diào)控關(guān)系,探討其對(duì)食管癌發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制。方法采用RT-PCR和Western blotting的方法檢測(cè)GSK3β在食管癌及癌旁組織中m RNA和蛋白水平的表達(dá)。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)GSK3β及STAT3在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)情況。分析GSK3β及STAT3的表達(dá)與食管癌患者臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。同時(shí)采用RT-PCR檢測(cè)GSK3β在不同分化食管癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。應(yīng)用MTT試驗(yàn)、Wound Healing試驗(yàn)檢測(cè)GSK3β及STAT3抑制劑對(duì)食管癌細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖、遷移能力的影響。將食管癌細(xì)胞株KYSE70細(xì)胞注射至裸鼠皮下,通過裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn),將GSK3β和STAT3抑制劑注射至裸鼠體內(nèi),觀察其對(duì)裸鼠成瘤時(shí)間、瘤體大小的影響。應(yīng)用免疫組化檢測(cè)不同藥物處理組裸鼠腫瘤組織中GSK3β、STAT3、P-STAT3的表達(dá)變化。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.RT-PCR結(jié)果顯示,與相應(yīng)癌旁組織相比,GSK3βm RNA在食管癌組織中表達(dá)明顯升高(P0.05),同時(shí),在不同分化程度的食管癌細(xì)胞系(ESC)中檢測(cè)其m RNA水平,結(jié)果顯示GSK3βm RNA在低分化ESC中(KYSE70)的表達(dá)顯著高于高、中分化的ESC(KYSE30,EC9706,KYSE140)。Western blotting結(jié)果顯示,與相應(yīng)癌旁組織相比,GSK3β蛋白在食管癌組織中表達(dá)明顯升高,然而磷酸化后的GSK3β(P-GSK3βSer9)在癌旁組織中卻明顯升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化結(jié)果顯示GSK3β及STAT3的陽性表達(dá)均呈棕黃色顆粒,主要定位于胞質(zhì),部分胞核亦可見著色。在50例食管癌組織、相應(yīng)癌旁組織中GSK3β的表達(dá)陽性率分別為64%、18%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),GSK3β的陽性表達(dá)與性別、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);STAT3的陽性表達(dá)率分別為66%、42%,差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),STAT3的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期相關(guān)(P0.05)。且GSK3β及STAT3表達(dá)呈正相關(guān)。隨后我們將RT-PCR、Western blotting、免疫組化結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果表明GSK3β在m RNA及蛋白水平表達(dá)具有一致性。2.對(duì)50例食管癌病人進(jìn)行隨訪,結(jié)果顯示GSK3β陽性組和陰性組30個(gè)月生存率分別為56.3%和83.3%;STAT3陽性組和陰性組生存率分別為51.4%和86.6%,Kaplan-Meier生存分析表明,與陰性組相比,GSK3β和STAT3陽性表達(dá)組均預(yù)后較差(P0.05)。3.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明,應(yīng)用GSK3β及STAT3抑制劑后,均可以抑制食管癌細(xì)胞系KYSE30及KYSE70細(xì)胞及裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),且兩種抑制劑合用后其抑制效果更加明顯。免疫組化結(jié)果表明,應(yīng)用GSK3β及STAT3抑制劑后,與對(duì)照組相比,GSK3β、STAT3、P-STAT3的表達(dá)均發(fā)生變化。其結(jié)果提示GSK3β可能潛在調(diào)控STAT3進(jìn)而影響食管癌的發(fā)生、發(fā)展。結(jié)論1.GSK-3β及STAT3在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于食管癌旁組織,提示其可能參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展。且兩者在食管癌的發(fā)展中可能具有協(xié)同作用;GSK3β及STAT3可能成為食管癌患者預(yù)后的指標(biāo)。2.GSK3β及STAT3抑制劑抑制了食管鱗癌細(xì)胞的增殖、遷移能力及裸鼠移植瘤的生長(zhǎng);GSK3β可能潛在調(diào)控STAT3影響食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展,兩因子可能成為食管鱗癌治療的分子靶標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1

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