本文關(guān)鍵詞：PTEN在胰腺癌增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究

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【摘要】：【背景】胰腺癌目前仍是全球范圍內(nèi)常見(jiàn)惡性腫瘤之一,其病死率高,生存期短,死亡率居惡性腫瘤的第四位。由于胰腺癌的發(fā)病特點(diǎn),超過(guò)80%的胰腺癌病人確診時(shí)已為晚期,并已失去了根治性手術(shù)治療的機(jī)會(huì),且放化療、免疫治療等手段對(duì)胰腺癌的生存率和預(yù)后無(wú)明顯改善,其中位生存期僅為3-6個(gè)月,5年生存率小于5%,故探討胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制對(duì)胰腺癌的診治至關(guān)重要。PTEN是首個(gè)發(fā)現(xiàn)的能夠編碼具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重活性蛋白的基因,其在腫瘤抑癌基因中占據(jù)著重要的地位。目前發(fā)現(xiàn)大多數(shù)實(shí)質(zhì)性腫瘤如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等都存在PTEN基因的突變、缺失或低表達(dá),從而影響其腫瘤抑制功能,目前關(guān)于PTEN如何在胰腺癌的增殖及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用的研究仍相對(duì)較少。細(xì)胞自噬是繼細(xì)胞凋亡后發(fā)現(xiàn)的另一種細(xì)胞程序性死亡,自噬水平的高低對(duì)細(xì)胞的生存具有重要影響。EMT則是細(xì)胞由上皮表型向間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)化過(guò)程,其在胚胎發(fā)育、組織器官分化及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。隨著近些年對(duì)自噬及EMT的研究深入,PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制的相關(guān)研究引起廣泛關(guān)注。【目的】我們利用構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)及穩(wěn)定敲除PTEN的胰腺癌細(xì)胞株,通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)來(lái)探究PTEN對(duì)胰腺腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響,通過(guò)檢測(cè)自噬及EMT相關(guān)分子,進(jìn)一步闡明PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制�！痉椒ā客ㄟ^(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR及蛋白免疫印跡的方法檢測(cè)PTEN在不同胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,并在此研究基礎(chǔ)上通過(guò)慢病毒感染的方法構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌細(xì)胞株及穩(wěn)定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA細(xì)胞株、對(duì)照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA細(xì)胞株。通過(guò)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),流式檢測(cè)細(xì)胞周期,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),分別對(duì)PTEN在細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用在細(xì)胞水平進(jìn)行研究。通過(guò)裸鼠門靜脈肝轉(zhuǎn)移模型從動(dòng)物水平對(duì)PTEN在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用進(jìn)行研究。通過(guò)Western-blot對(duì)自噬相關(guān)分子LC3、Becline1,EMT相關(guān)分子E-cadherin、N-cadherin、snail等的檢測(cè),進(jìn)一步探討PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌中的作用機(jī)制�！窘Y(jié)果】1.成功構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌細(xì)胞株及穩(wěn)定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA細(xì)胞株、對(duì)照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA細(xì)胞株。2.PTEN抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖,并且對(duì)細(xì)胞周期G1期有阻滯作用。3.PTEN的缺失導(dǎo)致胰腺癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的能力明顯增強(qiáng)。4.建立裸鼠門靜脈肝轉(zhuǎn)移模型,通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了PTEN的缺失可以促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生。5.PTEN促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞自噬的發(fā)生。6.PTEN的缺失對(duì)胰腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生有促進(jìn)作用�！窘Y(jié)論】PTEN的丟失會(huì)導(dǎo)致胰腺癌增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的增加。PTEN有增強(qiáng)細(xì)胞自噬及抑制EMT發(fā)生的作用。PTEN的缺失可能是通過(guò)抑制細(xì)胞自噬及促進(jìn)EMT,從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9

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3 郝純毅 北京腫瘤醫(yī)院肝膽胰外二科主任醫(yī)師;酗酒和吸煙最傷胰腺[N];大眾科技報(bào);2011年

4 記者 朱弼瑜　專業(yè)指導(dǎo) 劉玉坦 新安國(guó)際醫(yī)院普通外科副主任醫(yī)師 董波 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)學(xué)科負(fù)責(zé)人、公共營(yíng)養(yǎng)師;健康生活,遠(yuǎn)離“癌癥之王”[N];嘉興日?qǐng)?bào);2011年

5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

本文編號(hào)：1264050