本文關(guān)鍵詞：PTEN在胰腺癌增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機制的研究

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【摘要】：【背景】胰腺癌目前仍是全球范圍內(nèi)常見惡性腫瘤之一,其病死率高,生存期短,死亡率居惡性腫瘤的第四位。由于胰腺癌的發(fā)病特點,超過80%的胰腺癌病人確診時已為晚期,并已失去了根治性手術(shù)治療的機會,且放化療、免疫治療等手段對胰腺癌的生存率和預(yù)后無明顯改善,其中位生存期僅為3-6個月,5年生存率小于5%,故探討胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)機制對胰腺癌的診治至關(guān)重要。PTEN是首個發(fā)現(xiàn)的能夠編碼具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重活性蛋白的基因,其在腫瘤抑癌基因中占據(jù)著重要的地位。目前發(fā)現(xiàn)大多數(shù)實質(zhì)性腫瘤如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等都存在PTEN基因的突變、缺失或低表達,從而影響其腫瘤抑制功能,目前關(guān)于PTEN如何在胰腺癌的增殖及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用的研究仍相對較少。細胞自噬是繼細胞凋亡后發(fā)現(xiàn)的另一種細胞程序性死亡,自噬水平的高低對細胞的生存具有重要影響。EMT則是細胞由上皮表型向間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)化過程,其在胚胎發(fā)育、組織器官分化及腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。隨著近些年對自噬及EMT的研究深入,PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制的相關(guān)研究引起廣泛關(guān)注�！灸康摹课覀兝脴�(gòu)建穩(wěn)定過表達及穩(wěn)定敲除PTEN的胰腺癌細胞株,通過體內(nèi)和體外實驗來探究PTEN對胰腺腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和對細胞增殖、細胞周期的影響,通過檢測自噬及EMT相關(guān)分子,進一步闡明PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用機制。【方法】通過實時定量熒光PCR及蛋白免疫印跡的方法檢測PTEN在不同胰腺癌細胞株中的表達情況,并在此研究基礎(chǔ)上通過慢病毒感染的方法構(gòu)建穩(wěn)定過表達PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌細胞株及穩(wěn)定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA細胞株、對照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA細胞株。通過CCK-8細胞增殖實驗,流式檢測細胞周期,細胞劃痕實驗及Transwell細胞侵襲轉(zhuǎn)移實驗,分別對PTEN在細胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用在細胞水平進行研究。通過裸鼠門靜脈肝轉(zhuǎn)移模型從動物水平對PTEN在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用進行研究。通過Western-blot對自噬相關(guān)分子LC3、Becline1,EMT相關(guān)分子E-cadherin、N-cadherin、snail等的檢測,進一步探討PTEN與自噬及EMT的關(guān)系及其在胰腺癌中的作用機制。【結(jié)果】1.成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌細胞株及穩(wěn)定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA細胞株、對照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA細胞株。2.PTEN抑制胰腺癌細胞的增殖,并且對細胞周期G1期有阻滯作用。3.PTEN的缺失導(dǎo)致胰腺癌細胞侵襲及轉(zhuǎn)移的能力明顯增強。4.建立裸鼠門靜脈肝轉(zhuǎn)移模型,通過體內(nèi)實驗驗證了PTEN的缺失可以促進胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生。5.PTEN促進胰腺癌細胞自噬的發(fā)生。6.PTEN的缺失對胰腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生有促進作用。【結(jié)論】PTEN的丟失會導(dǎo)致胰腺癌增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的增加。PTEN有增強細胞自噬及抑制EMT發(fā)生的作用。PTEN的缺失可能是通過抑制細胞自噬及促進EMT,從而促進細胞的增殖和轉(zhuǎn)移的發(fā)生。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

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