發(fā)布時間：2017-12-07 11:06

  本文關鍵詞：CLEC9A對樹突狀細胞功能和特性的實驗研究

  更多相關文章： 樹突狀細胞 DC2.4細胞 CLEC9A 表面分子

【摘要】：目的:研究經(jīng)脂質體轉染CLEC9A基因,構建過表達CLEC9A的大鼠樹突狀細胞及DC2.4細胞,并檢測樹突狀細胞功能和性質的變化。方法:提取4-8周齡SD雄性大鼠股骨骨髓細胞,通過紅細胞裂解液篩除紅細胞,獲得骨髓單個核細胞(bone marrow-mononuclear cells,BM-MNCs),其中貼壁細胞經(jīng)細胞因子GM-CSF,IL-4和TNF-α誘導產(chǎn)生DCs,每日觀察DCs形態(tài)變化;由蘇大附二院神經(jīng)外科課題組惠贈的DC2.4傳代鋪板待轉染;收集生長到第5天的DCs及傳代DC2.4開始轉染不同濃度的質粒-脂質體復合物,通過熒光及Real-Time、PCR檢測CLEC9A轉染效率,尋找出最適的轉染濃度;目的基因、空載體轉染DC細胞及DC2.4細胞,流式細胞儀檢測不同轉染組的轉染效率,PCR與Western blot法檢測CLEC9A在大鼠DC細胞及DC2.4細胞中的表達情況,構建出過表達CLEC9A的樹突狀細胞,即DC/CLEC9A細胞和DC2.4/CLEC9A細胞;采用PCR與流式細胞技術檢測在大鼠腫瘤抗原刺激下的各組細胞表面分子CD80、CD83、CD86和MHCⅡ的表達情況,從而研究DC轉染前后功能和性質的變化。結果:通過不同濃度質粒-脂質體復合物轉染大鼠骨髓DC及DC2.4細胞,發(fā)現(xiàn)質粒CLCE9A濃度為3ug,按脂質體:質粒=3ul:1ug的比例形成的質粒-脂質體復合體的轉染效率最好;轉染后大鼠骨髓DC和DC2.4細胞表面的CLEC9A分子表達量較未轉染細胞均明顯提高,DC2.4細胞的轉染效率相比DC細胞的轉染效率,高出2倍左右;在大鼠腫瘤抗原的刺激下,DC/CLEC9A細胞表面分子CD80、CD83、CD86和MHCⅡ表達量均較未轉染前明顯增加,但基本未檢測到DC2.4/CLEC9A細胞表面的CD80、CD83、CD86和MHCⅡ分子較未轉染前有明顯增加。結論:1.脂質體對貼壁生長的DC2.4細胞的轉染效率明顯高于半懸浮生長狀態(tài)的DC細胞;2.轉染濃度為3ug:9ul的質粒-脂質體復合物轉染樹突狀細胞的效率更高;3.貼壁生長的DC2.4細胞株雖然能傳代,但缺乏正常DC細胞表面高表達的分子,如CD80、CD83、CD86和MHCⅡ,雖然脂質體轉染效率很高,但在腫瘤抗原刺激后,表面分子的表達量并未有相應地明顯增加,細胞株DC2.4有可能在傳的過程中逐漸失去了DC細胞正常的活性和生理功能;4.大鼠骨髓DC細胞表面分子CLEC9A的表達量增多可增強DC細胞的活性和功能,有一定的臨床應用前景。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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本文編號：1262160