本文關(guān)鍵詞：CLEC9A對樹突狀細(xì)胞功能和特性的實驗研究

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【摘要】：目的:研究經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CLEC9A基因,構(gòu)建過表達CLEC9A的大鼠樹突狀細(xì)胞及DC2.4細(xì)胞,并檢測樹突狀細(xì)胞功能和性質(zhì)的變化。方法:提取4-8周齡SD雄性大鼠股骨骨髓細(xì)胞,通過紅細(xì)胞裂解液篩除紅細(xì)胞,獲得骨髓單個核細(xì)胞(bone marrow-mononuclear cells,BM-MNCs),其中貼壁細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子GM-CSF,IL-4和TNF-α誘導(dǎo)產(chǎn)生DCs,每日觀察DCs形態(tài)變化;由蘇大附二院神經(jīng)外科課題組惠贈的DC2.4傳代鋪板待轉(zhuǎn)染;收集生長到第5天的DCs及傳代DC2.4開始轉(zhuǎn)染不同濃度的質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物,通過熒光及Real-Time、PCR檢測CLEC9A轉(zhuǎn)染效率,尋找出最適的轉(zhuǎn)染濃度;目的基因、空載體轉(zhuǎn)染DC細(xì)胞及DC2.4細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測不同轉(zhuǎn)染組的轉(zhuǎn)染效率,PCR與Western blot法檢測CLEC9A在大鼠DC細(xì)胞及DC2.4細(xì)胞中的表達情況,構(gòu)建出過表達CLEC9A的樹突狀細(xì)胞,即DC/CLEC9A細(xì)胞和DC2.4/CLEC9A細(xì)胞;采用PCR與流式細(xì)胞技術(shù)檢測在大鼠腫瘤抗原刺激下的各組細(xì)胞表面分子CD80、CD83、CD86和MHCⅡ的表達情況,從而研究DC轉(zhuǎn)染前后功能和性質(zhì)的變化。結(jié)果:通過不同濃度質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物轉(zhuǎn)染大鼠骨髓DC及DC2.4細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒CLCE9A濃度為3ug,按脂質(zhì)體:質(zhì)粒=3ul:1ug的比例形成的質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合體的轉(zhuǎn)染效率最好;轉(zhuǎn)染后大鼠骨髓DC和DC2.4細(xì)胞表面的CLEC9A分子表達量較未轉(zhuǎn)染細(xì)胞均明顯提高,DC2.4細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率相比DC細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,高出2倍左右;在大鼠腫瘤抗原的刺激下,DC/CLEC9A細(xì)胞表面分子CD80、CD83、CD86和MHCⅡ表達量均較未轉(zhuǎn)染前明顯增加,但基本未檢測到DC2.4/CLEC9A細(xì)胞表面的CD80、CD83、CD86和MHCⅡ分子較未轉(zhuǎn)染前有明顯增加。結(jié)論:1.脂質(zhì)體對貼壁生長的DC2.4細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率明顯高于半懸浮生長狀態(tài)的DC細(xì)胞;2.轉(zhuǎn)染濃度為3ug:9ul的質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞的效率更高;3.貼壁生長的DC2.4細(xì)胞株雖然能傳代,但缺乏正常DC細(xì)胞表面高表達的分子,如CD80、CD83、CD86和MHCⅡ,雖然脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很高,但在腫瘤抗原刺激后,表面分子的表達量并未有相應(yīng)地明顯增加,細(xì)胞株DC2.4有可能在傳的過程中逐漸失去了DC細(xì)胞正常的活性和生理功能;4.大鼠骨髓DC細(xì)胞表面分子CLEC9A的表達量增多可增強DC細(xì)胞的活性和功能,有一定的臨床應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 羅軍強;臧林泉;;腫瘤疫苗的研究進展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年02期

2 楊文博;趙X;;樹突狀細(xì)胞的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年15期

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本文編號：1262160