本文關(guān)鍵詞：Cx43通過抑制EMT逆轉(zhuǎn)人肺腺癌細(xì)胞A549對順鉑的獲得性耐藥

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【摘要】：目的:觀察Cx43對人肺腺癌細(xì)胞A549的獲得性耐藥的影響,以及與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的關(guān)系。方法:采用MTT法確定耐藥株,用不同濃度的順鉑(0,20,40,80,160,320μM)分別作用人肺腺癌敏感株(A549)和人肺腺癌耐順鉑耐藥株(A549/CDDP)48 h后測定細(xì)胞存活率,確定耐藥指數(shù)。1.采用Western blotting法檢測A549和A549/CDDP中Cx43及EMT標(biāo)志蛋白上皮鈣粘附素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、轉(zhuǎn)錄因子Snail,Slug的表達(dá),及干擾和過表達(dá)Cx43后EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)。2.采用Si RNA小干擾的方法下調(diào)Cx43的表達(dá),用過表達(dá)方法上調(diào)Cx43的表達(dá)。3.采用Transwell法檢測A549和A549/CDDP的侵襲能力,以及干擾或過表達(dá)Cx43后細(xì)胞的侵襲能力。4.采用劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測A549和A549/CDDP的轉(zhuǎn)移能力,以及干擾或過表達(dá)Cx43后細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:組間數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。結(jié)果:1.耐藥株的鑒定M TT結(jié)果顯示:A549/CDDP的IC50=311.2μM,A549的IC50=53.6μM,RI=5.8,結(jié)果顯示A549/CDDP對順鉑產(chǎn)生了獲得性耐藥。2.A549/CDDP細(xì)胞與A549細(xì)胞相比發(fā)生了EMT轉(zhuǎn)化Western blotting的結(jié)果顯示與A549相比A549/CDDP細(xì)胞中的上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin的表達(dá)顯著降低,而間質(zhì)標(biāo)志蛋白Vimentin的表達(dá)顯著增強(qiáng),轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug的表達(dá)也顯著增強(qiáng)。3.與A549細(xì)胞相比A549/CDDP細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的獲得是EMT改變的重要標(biāo)志,Transwell和劃痕的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與A549相比A549/CDDP細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)。4.與A549細(xì)胞相比A549/CDDP細(xì)胞中Cx43的表達(dá)量顯著降低Western blotting結(jié)果表明,與A549相比A549/CDDP細(xì)胞中的Cx43的表達(dá)量顯著降低,此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.上調(diào)Cx43的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)A549/CDDP細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)化采用過表達(dá)技術(shù)將含目的基因的質(zhì)粒(pc DNA-Cx43)與空質(zhì)粒(pc DNA)分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入A549/CDDP細(xì)胞中,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)與pc DNA相比pc DNA-Cx43組過表達(dá)Cx43后細(xì)胞的形態(tài)重新變得圓潤,細(xì)胞間粘附增強(qiáng);Western blotting結(jié)果顯示:與pc DNA相比pc DNA-Cx43組過表達(dá)Cx43后E-cadherin的表達(dá)顯著增強(qiáng)而間質(zhì)標(biāo)志蛋白Vimentin的表達(dá)顯著降低,轉(zhuǎn)錄因子Snail,Slug的表達(dá)也顯著降低。6.下調(diào)Cx43的表達(dá)可誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化采用基因敲除技術(shù)將含目的基因的小干擾片段(si RNA-Cx43)與空質(zhì)粒(NC)分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入A549細(xì)胞中在,在A549細(xì)胞中沉默Cx43的表達(dá)后,Western Blottin結(jié)果顯示:與NC組相比si RNA-Cx43的E-cadherin的表達(dá)顯著降低而間質(zhì)標(biāo)志蛋白Vimentin的表達(dá)顯著增強(qiáng),轉(zhuǎn)錄因子Snail,Slug的表達(dá)也顯著增強(qiáng)。7.Cx43可調(diào)控人肺腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在A549/CDDP細(xì)胞中過表達(dá)Cx43后,侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著降低;Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在A549/CDDP細(xì)胞中沉默Cx43的表達(dá)后,侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)。8.Cx43可調(diào)控人肺腺癌細(xì)胞對順鉑的敏感性結(jié)果顯示,在A549/CDDP細(xì)胞中過表達(dá)Cx43后,對CDDP的敏感性顯著增強(qiáng);在A549細(xì)胞中干擾Cx43后,對CDDP的敏感性顯著降低。以上結(jié)果均表明Cx43可調(diào)控人肺腺癌細(xì)胞對CDDP的敏感性。結(jié)論:Cx43可調(diào)控人肺腺癌A549對順鉑的獲得性耐藥,可能與Cx43可抑制EMT的作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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3 劉鳳芝,王波,田長富,史歷,王吾如;高低轉(zhuǎn)移性不同的人肺腺癌細(xì)胞膜脂肪酸分析[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年03期

4 張春燕;劉晏杰;劉旭;張金龍;;體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞液氮凍存及復(fù)蘇培養(yǎng)[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;1992年02期

5 張晶明，郭崇潔，，趙天德，高福云，張華;人胚肺成纖維細(xì)胞與人肺腺癌細(xì)胞共同培養(yǎng)時的形態(tài)學(xué)變化[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;1996年04期

6 李玉光;張羅獻(xiàn);閻俊宇;馬利軍;馬厚志;;白喉毒素A基因轉(zhuǎn)染對人肺腺癌細(xì)胞體內(nèi)外生長的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年03期

7 譚玉英;;不同轉(zhuǎn)移表型的人肺腺癌細(xì)胞的藥物敏感性比較[J];腫瘤防治研究;1990年02期

8 田長富;王波;任麗君;張金龍;王吾如;劉風(fēng)芝;;幾種脂肪酸對不同轉(zhuǎn)移能力的人肺腺癌細(xì)胞膜脂流動性的影響[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;1992年02期

9 田長富,劉理,王波,任麗君,王志華,王吾如,文海芳,孫雅慧;不同轉(zhuǎn)移表型人肺腺癌細(xì)胞膜脂組成及膜流動性的分析[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;1996年01期

10 熊辛,經(jīng)曉杰,周克敏;人肺腺癌細(xì)胞抗阿霉素細(xì)胞株的建立及其特性研究[J];云南醫(yī)藥;1998年01期

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1 劉輝;李殿俊;田長富;劉旭;;人IL-2重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞的體外生物學(xué)特性的研究(英文)[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

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4 馬勇杰;李紅;許凱黎;古宏晨;;人肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1與人正常肺WI-38對納米顆粒吞噬作用的比較研究[A];上海市顆粒學(xué)會2005年年會論文集[C];2005年

5 盧忠心;陳正炎;;PKC抑制劑對人肺腺癌細(xì)胞端粒酶活性的影響[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

6 鄢祝兵;段友容;馬勇杰;古宏晨;徐宏;;谷胱甘肽修飾的納米Fe_3O_4與人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1相互作用的初步研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

7 宋宇;鄧旭明;趙文杰;房金榮;;吳茱萸堿誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1細(xì)胞周期阻滯及凋亡[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)討論會論文與摘要集[C];2006年

8 秦建文;周靜敏;陳寶元;;HIF-1alpha對低氧人肺腺癌細(xì)胞COX-2表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 夏瑩;胡成平;張梅春;楊華平;周東波;梁碩;;ERCC1表達(dá)與人肺腺癌細(xì)胞順鉑耐藥的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

10 李天天;李殿俊;田長富;劉旭;劉輝;;人TNF—α及IL—2重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

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1 鄧波;人肺腺癌細(xì)胞TGF-β1對細(xì)胞凋亡調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

2 王躍;7，8-二羥基香豆素抑制A549人肺腺癌細(xì)胞作用的研究[D];吉林大學(xué);2013年

3 吳軍;脂質(zhì)體介導(dǎo)的cFLIP反義基因治療人肺腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

4 蔣迎九;神經(jīng)酰胺AD2646抑制人肺腺癌細(xì)胞A549生長的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

5 曹立明;人肺腺癌細(xì)胞耐順鉑機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2008年

6 張桂芝;單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MCT1基因反義表達(dá)重組載體轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞及其生物學(xué)效應(yīng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2001年

7 李青峰;軸突導(dǎo)向因子Netrin-1在肺癌血管擬態(tài)和血管新生中的作用及機(jī)制的初步研究[D];華中科技大學(xué);2011年

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1 聶歡;GPC5對人肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 何峰;RGD修飾的腺病毒介導(dǎo)ING4或/和P53基因表達(dá)對人肺腺癌細(xì)胞的體內(nèi)外生長抑制作用[D];蘇州大學(xué);2015年

3 顧昕;自噬在人肺腺癌細(xì)胞放療抵抗形成中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 李利;Cx43通過抑制EMT逆轉(zhuǎn)人肺腺癌細(xì)胞A549對順鉑的獲得性耐藥[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

5 紀(jì)丕軍;白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素12對人肺腺癌細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

6 王樹崗;人肺腺癌細(xì)胞的CD133表達(dá)及CD133陽性人肺腺癌細(xì)胞的干細(xì)胞特性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 滑峰;納米羥基磷灰石對人肺腺癌細(xì)胞影響的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

8 王岳湘;shRNA沉默Annexin A2基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞A549生物學(xué)行為的影響[D];中南大學(xué);2010年

9 張倩倩;MRP1功能變化對人肺腺癌細(xì)胞化療耐藥的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

10 李麗萍;靶向CLIC1的RNA干擾對人肺腺癌細(xì)胞生物功能的影響[D];暨南大學(xué);2010年

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