本文關鍵詞：Cx43通過抑制EMT逆轉人肺腺癌細胞A549對順鉑的獲得性耐藥

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【摘要】：目的:觀察Cx43對人肺腺癌細胞A549的獲得性耐藥的影響,以及與上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的關系。方法:采用MTT法確定耐藥株,用不同濃度的順鉑(0,20,40,80,160,320μM)分別作用人肺腺癌敏感株(A549)和人肺腺癌耐順鉑耐藥株(A549/CDDP)48 h后測定細胞存活率,確定耐藥指數。1.采用Western blotting法檢測A549和A549/CDDP中Cx43及EMT標志蛋白上皮鈣粘附素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、轉錄因子Snail,Slug的表達,及干擾和過表達Cx43后EMT相關蛋白的表達。2.采用Si RNA小干擾的方法下調Cx43的表達,用過表達方法上調Cx43的表達。3.采用Transwell法檢測A549和A549/CDDP的侵襲能力,以及干擾或過表達Cx43后細胞的侵襲能力。4.采用劃痕實驗來檢測A549和A549/CDDP的轉移能力,以及干擾或過表達Cx43后細胞的轉移能力。5.統(tǒng)計學方法:組間數據分析采用SPSS13.0軟件進行t檢驗。結果:1.耐藥株的鑒定M TT結果顯示:A549/CDDP的IC50=311.2μM,A549的IC50=53.6μM,RI=5.8,結果顯示A549/CDDP對順鉑產生了獲得性耐藥。2.A549/CDDP細胞與A549細胞相比發(fā)生了EMT轉化Western blotting的結果顯示與A549相比A549/CDDP細胞中的上皮標志蛋白E-cadherin的表達顯著降低,而間質標志蛋白Vimentin的表達顯著增強,轉錄因子Snail、Slug的表達也顯著增強。3.與A549細胞相比A549/CDDP細胞的侵襲轉移能力顯著增強細胞侵襲轉移能力的獲得是EMT改變的重要標志,Transwell和劃痕的實驗結果表明,與A549相比A549/CDDP細胞的侵襲轉移能力顯著增強。4.與A549細胞相比A549/CDDP細胞中Cx43的表達量顯著降低Western blotting結果表明,與A549相比A549/CDDP細胞中的Cx43的表達量顯著降低,此差異具有統(tǒng)計學意義。5.上調Cx43的表達可逆轉A549/CDDP細胞的EMT轉化采用過表達技術將含目的基因的質粒(pc DNA-Cx43)與空質粒(pc DNA)分別轉染進入A549/CDDP細胞中,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)發(fā)現與pc DNA相比pc DNA-Cx43組過表達Cx43后細胞的形態(tài)重新變得圓潤,細胞間粘附增強;Western blotting結果顯示:與pc DNA相比pc DNA-Cx43組過表達Cx43后E-cadherin的表達顯著增強而間質標志蛋白Vimentin的表達顯著降低,轉錄因子Snail,Slug的表達也顯著降低。6.下調Cx43的表達可誘導A549細胞發(fā)生EMT轉化采用基因敲除技術將含目的基因的小干擾片段(si RNA-Cx43)與空質粒(NC)分別轉染進入A549細胞中在,在A549細胞中沉默Cx43的表達后,Western Blottin結果顯示:與NC組相比si RNA-Cx43的E-cadherin的表達顯著降低而間質標志蛋白Vimentin的表達顯著增強,轉錄因子Snail,Slug的表達也顯著增強。7.Cx43可調控人肺腺癌細胞的侵襲轉移能力Transwell實驗和劃痕的實驗結果表明在A549/CDDP細胞中過表達Cx43后,侵襲轉移能力顯著降低;Transwell實驗和劃痕的實驗結果表明在A549/CDDP細胞中沉默Cx43的表達后,侵襲轉移能力顯著增強。8.Cx43可調控人肺腺癌細胞對順鉑的敏感性結果顯示,在A549/CDDP細胞中過表達Cx43后,對CDDP的敏感性顯著增強;在A549細胞中干擾Cx43后,對CDDP的敏感性顯著降低。以上結果均表明Cx43可調控人肺腺癌細胞對CDDP的敏感性。結論:Cx43可調控人肺腺癌A549對順鉑的獲得性耐藥,可能與Cx43可抑制EMT的作用有關。
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：1260790