發(fā)布時(shí)間：2017-12-06 20:20

  本文關(guān)鍵詞：NLRP6對(duì)HCT116細(xì)胞增殖和遷移的影響及在大腸癌組織的表達(dá)

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【摘要】：目的:研究干擾NLRP6的表達(dá)對(duì)HCT116細(xì)胞增殖、遷移的影響。探討NLRP6在大腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,為大腸癌的靶向基因治療奠定基礎(chǔ)。方法:HCT116細(xì)胞的分組:對(duì)照組Si-CON(NC-shRNA細(xì)胞懸液,NLRP6正常表達(dá))、實(shí)驗(yàn)組Si-NLRP6(NLRP6-shRNA細(xì)胞懸液,干擾并下調(diào)NLRP6的表達(dá))。1)培養(yǎng)六株大腸癌細(xì)胞株LoVo、SW620、SW480、HCT116、HT29、SW1116,采用qRT-PCR方法檢測(cè)NLRP6 mRNA表達(dá),Western blotting法檢測(cè)NLRP6蛋白表達(dá),篩選出NLRP6高表達(dá)細(xì)胞株HCT116。2)用慢病毒包裝質(zhì)粒NLRP6-shRNA轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞,干擾NLRP6基因表達(dá),采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCT116細(xì)胞的遷移、增殖能力。3)Western blotting法檢測(cè)HCT116細(xì)胞P38MAPK、pP38MAPK、AKT、p-AKT、EGFR、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)。4)用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn),檢測(cè)干擾NLRP6對(duì)HCT116細(xì)胞體內(nèi)成瘤的影響。將裸鼠隨機(jī)分成2組:Si-CON組、Si-NLRP6組,每組9只。注射細(xì)胞濃度為2×106/ml,每部位接種0.1ml。飼養(yǎng)4周后處死裸鼠,剝離瘤體后稱重,游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最大徑a和最小徑b,按公式V=ab2/2計(jì)算腫瘤結(jié)節(jié)體積。同時(shí)解剖裸鼠肺臟,觀察肺部ii腫瘤轉(zhuǎn)移情況,并測(cè)量轉(zhuǎn)移區(qū)域面積,制作新鮮病理標(biāo)本,he染色鏡下觀察肺部病理情況。5)收集71例大腸癌手術(shù)切除標(biāo)本及45例癌旁正常組織標(biāo)本,免疫組化sp法檢測(cè)nlrp6蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1)qrt-pcr和westernblotting:nlrp6mrna和蛋白在六種大腸癌細(xì)胞株中都有不同水平的表達(dá),在hct116細(xì)胞株中表達(dá)水平最高。2)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn):si-nlrp6組劃痕修復(fù)率為(37.30±1.90)%,si-con組劃痕修復(fù)率為(10.00±1.92)%,si-nlrp6組細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn):si-nlrp6組細(xì)胞形成的集落數(shù)較si-con組明顯增多,si-nlrp6組集落形成率(63.1±14.2)%,si-con組集落形成率(20.1±9.5)%,干擾nlrp6能促進(jìn)hct116細(xì)胞增殖,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3)westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示,hct116細(xì)胞p38mapk、p-p38mapk、akt、p-akt、egfr、mmp-2、mmp-9蛋白均有不同程度的表達(dá),與si-con組表達(dá)水平相比較,si-nlrp6組蛋白表達(dá)水平顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4)接種hct116細(xì)胞4周后,裸鼠皮下移植瘤形成,si-nlrp6組移植瘤體積明顯大于對(duì)照組,he染色肺部癌細(xì)胞數(shù)目更多,肺轉(zhuǎn)移區(qū)域面積更大,肺轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目更多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5)nlrp6蛋白陽(yáng)性表達(dá)于胞漿,為棕黃色或棕褐色顆粒,癌旁正常組織陽(yáng)性率68.9%,大腸癌組織陽(yáng)性率42.3%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(?2=7.837,p=0.005)。nlrp6在大腸癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位、組織分化程度以及浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(p0.05)。NLRP6在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率52.4%,明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的27.6%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(?2=4.322,P=0.038);在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率47.5%,明顯高于有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的16.7%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(?2=3.875,P=0.049);在TNM I期/II期陽(yáng)性率55.0%,高于III期/IV期陽(yáng)性率25.8%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(?2=6.100,P=0.014)。結(jié)論:1)NLRP6在大腸癌HCT116細(xì)胞株中相對(duì)高表達(dá)。2)干擾NLRP6能促進(jìn)大腸癌HCT116細(xì)胞增殖和遷移,并上調(diào)P38MAPK、p-P38MAPK、AKT、p-AKT、EGFR、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá),同時(shí)促進(jìn)裸鼠皮下成瘤及肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生。3)NLRP6在大腸癌組織中表達(dá)偏低,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)。NLRP6的表達(dá)可能與大腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高梅澾,薛東波,趙明,李愛(ài)東,呂洪光,李泮泉,劉淑德;83例大腸癌多藥耐藥基因的檢測(cè)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2001年12期

2 李俊,曹樺,吳寧,孟紅,汪永壽,陳玉祥,程雄;大腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)的關(guān)系[J];華西醫(yī)學(xué);2002年04期

3 楊磊,丁彥青,張進(jìn)華;廣東地區(qū)2 037例大腸癌臨床病理分析[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年11期

4 黃寧霞,胡建群;大腸癌637例臨床病理分析[J];九江醫(yī)學(xué);2003年01期

5 高梅澾,謝向臣,幺春艷,呂洪光;復(fù)發(fā)及多源發(fā)大腸癌多藥耐藥基因檢測(cè)[J];大腸肛門病外科雜志;2004年04期

6 張茂;德力格爾圖;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與大腸癌的研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

7 邵春紅;盧志明;;大腸癌[J];山東醫(yī)藥;2008年48期

8 費(fèi)伯健;吳露露;周士福;齊曉薇;;胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ、胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ受體在大腸癌中的表達(dá)及其意義[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2009年06期

9 肖著軍;許岸高;;白細(xì)胞介素-8與大腸癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年22期

10 馬鴻基;;大腸癌社會(huì)醫(yī)學(xué)初探[J];中國(guó)社會(huì)醫(yī)學(xué);1989年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭善禹;杜寬航;卜文;;細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子在大腸癌中的表達(dá)意義[A];2001'全國(guó)腫瘤外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

2 鄭樹(shù);;我國(guó)大腸癌易感人群研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

3 肖冰;王媛媛;張亞歷;;大腸癌干細(xì)胞作用相關(guān)基因及信號(hào)通路的篩選鑒定[A];第二十三屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

4 崔q輝;陳棟;楊振宇;;細(xì)胞粘附分子在大腸癌組織中表達(dá)及其臨床意義[A];第十一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合大腸肛門病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 鄭樹(shù);蔡心涵;曹江;耿禮義;鄭雷;張顏明;施正政;;人新的大腸癌負(fù)相關(guān)基因的研究[A];第六次全國(guó)大腸癌會(huì)議暨中日韓大腸癌會(huì)議論文匯編[C];1998年

6 耿敬姝;王艷穎;馮占軍;趙玉蘭;趙家宏;;大腸癌細(xì)胞增殖與P~(16)表達(dá)關(guān)系的研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

7 雷雯;周錫庚;郁寶銘;陳曉耕;王清水;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和血管生成與大腸癌發(fā)展的關(guān)系[A];2001'全國(guó)腫瘤外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

8 丁杰;;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子與大腸癌治療[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)外科分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

9 申洪;;大腸癌組織結(jié)構(gòu)的體視學(xué)診斷參數(shù)研究[A];首屆粵港生物物理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];1999年

10 許紅民;王強(qiáng);白雪娟;鐘定榮;曹秀堂;張金萍;丁彥青;姚開(kāi)泰;;大腸癌差異表達(dá)基因的篩查[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者 施嘉奇;抽點(diǎn)血,找出大腸癌早期線索[N];文匯報(bào);2010年

2 記者 衣曉峰 靳萬(wàn)慶 通訊員 李曉麗;大腸癌多藥耐藥判斷標(biāo)準(zhǔn)有新“尺度”[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

3 何苗苗 蔣卓勤;飲食相關(guān)成分在大腸癌發(fā)生中的作用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 通訊員 方序 周煒 記者 宦建新;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)大腸癌靶向細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

5 記者 張燦燦 特約記者 陸桂芳 通訊員 方序;加劇大腸癌進(jìn)展關(guān)鍵細(xì)胞現(xiàn)形[N];健康報(bào);2014年

6 記者 張樂(lè);一種細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致大腸癌腫瘤惡化[N];新華每日電訊;2014年

7 衣曉峰 李曉麗;腸癌多藥耐藥判斷有新說(shuō)[N];健康報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邱云平;基于色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的大腸癌代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2008年

2 馮曉瑩;胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)在大腸癌的表達(dá)及意義研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

3 馬怡茗;大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的篩選和生物學(xué)功能研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

4 陳遠(yuǎn)光;人大腸癌組織蛋白質(zhì)組二維凝膠電泳技術(shù)的建立及應(yīng)用[D];中南大學(xué);2003年

5 畢新宇;大腸癌病理學(xué)特征與預(yù)后的關(guān)系及硒蛋白-P在大腸癌組織中表達(dá)及其臨床意義[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

6 王媛媛;大腸癌干細(xì)胞基因表達(dá)譜特點(diǎn)及其信號(hào)通路的篩選鑒定[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

7 葉霖;單�；视椭久冈诖竽c癌中的作用及其作用機(jī)制的初步探討[D];華中科技大學(xué);2011年

8 龔磊;反義RNA技術(shù)下調(diào)多胺代謝關(guān)鍵酶抑制大腸癌細(xì)胞增殖及分子機(jī)理研究[D];山東大學(xué);2007年

9 許紅民;不同分化程度大腸癌的基因表達(dá)譜分析[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 湯思哲;大腸癌組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 唐光明;p53及其上游基因ATM、下游基因PUMA在大腸癌中的表達(dá)及意義[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

2 王苗鋒;大腸癌組織中VEGF、MIF的表達(dá)及臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 汝干;LncRNA-MALAT1與Hsa-miR-1互作機(jī)制對(duì)大腸癌放射敏感性的影響研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 王茜;細(xì)胞周期相關(guān)激酶在大腸癌組織中的表達(dá)及其意義[D];山東大學(xué);2015年

5 張明謙;ANKRD18B基因在肺癌和大腸癌中的甲基化與表達(dá)分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 趙碩;IDO在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2014年

7 高麗萍;LEA、CDw75抗原在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

8 肉克彥·庫(kù)達(dá)來(lái)提;維吾爾族與漢族大腸癌臨床病理特征及hMLH1、hMSH2蛋白表達(dá)差異[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

9 胡金龍;自噬相關(guān)基因在大腸癌中的表達(dá)及意義的相關(guān)性研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2014年

10 李明;大腸癌中NRP2表達(dá)調(diào)控相關(guān)miRNA的預(yù)測(cè)及鑒定[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2014年

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本文編號(hào)：1259852