本文關(guān)鍵詞：小分子化合物MLN4924靶向NEDD8活化酶（NAE）抑制非小細(xì)胞肺癌增殖的研究

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【摘要】：背景和目的NEDD8是一種類泛素樣蛋白,與泛素化途徑相似,在細(xì)胞生理過程中主要參與穩(wěn)定蛋白、調(diào)節(jié)底物蛋白活性以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等功能[4,6,71。研究證實(shí),抑制NEDD8通路將是一個(gè)新的抗腫瘤的方法和途徑。MLN4924是一種有效的、選擇性的NEDD8活化酶的小分子抑制劑,能夠與NEDD8活化酶(NAE)結(jié)合形成NAE-MLN4924復(fù)合物,抑制NEDD8活化酶活性,控制部分依賴于CRL酶的泛素化途徑,影響相關(guān)蛋白質(zhì)的降解。研究發(fā)現(xiàn),NAE有望成為研發(fā)抗腫瘤藥物的新靶點(diǎn),MLN4924作為NAE的抑制劑具有成為新型抗腫瘤藥物的希望。本研究以非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞為研究模型,觀察MLN4924對(duì)細(xì)胞生長的抑制作用,分析MLN4924干預(yù)后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖活性、周期分布和周期調(diào)控蛋白的表達(dá),探討MLN4924對(duì)細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控,明確MLN4924抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法體外培養(yǎng)入非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)分析不同濃度MLN4924作用細(xì)胞24、48和72h對(duì)其增殖的影響；集落克隆實(shí)驗(yàn)分析MLN4924對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響；PI單染法分析細(xì)胞周期分布；以及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D1和天然抑制蛋白p21、p27的表達(dá)。結(jié)果MLN4924呈劑量-時(shí)間依賴抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長,其中H1975細(xì)胞對(duì)MLN4924較為敏感,不同濃度(5、10、20、40μM)的MLN4924作用48h后,存活率分別為91.3±2.6%、86.0±4.2%、82.4±4.1%、79.8±3.4%,作用72h后,存活率分別為39.3±5.7%、39.7±4.1%、35.9±2.8%、36.9±2.1%。5、10、20和40μM MLN4924作用細(xì)胞7d,均顯著抑制H1975細(xì)胞形成集落克隆。10和40μM MLN4924作用細(xì)胞48h,G0/G1期細(xì)胞比例顯著增加,周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D1表達(dá)明顯下調(diào),其天然抑制蛋白p21、p27的表達(dá)水平顯著上調(diào)。結(jié)論MLN4924具有抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的作用效應(yīng),其分子機(jī)制是通過調(diào)控周期相關(guān)蛋白的表達(dá),將細(xì)胞阻滯于G0/G1期。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1259716