本文關(guān)鍵詞：UHRF2通過其PHD結(jié)構(gòu)域與H3K9ac的相互作用以及下調(diào)HepG2肝癌細(xì)胞中H3K9ac水平

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【摘要】：目的研究UHRF2與組蛋白H3乙�；�(H3K9ac和K3K14ac)的相互作用及兩者相互作用結(jié)合區(qū)域的鑒定。探討UHRF2分別在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中對K3K9ac和H3K14ac的影響及其分子機(jī)制。方法1. 在HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染UHRF2,進(jìn)行免疫熒光后,激光共聚焦檢測UHRF2與組蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在細(xì)胞內(nèi)的共定位現(xiàn)象。再在上述細(xì)胞中轉(zhuǎn)染UHRF2和空載質(zhì)粒,采用免疫沉淀技術(shù),研究UHRF2與H3K9ac和H3K14ac的相互作用。2. 通過雙酶切鑒定UHRF2各缺失體質(zhì)粒,將各缺失體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞,進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。研究UHRF2與H3K9ac和H3K14ac相互作用的結(jié)合區(qū)域。3. 通過免疫印跡和免疫組化化學(xué)方法檢測內(nèi)源性UHRF2、H3、 H3K9ac和H3K14ac蛋白在HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞中以及在肝癌和癌旁組織中的表達(dá)情況。4. 采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)UHRF2蛋白,通過免疫印跡檢測UHRF2在HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞中對H3K9ac和H3K14ac影響。同時(shí)通過免疫組織化學(xué)檢測肝癌標(biāo)本中UHRF2蛋白水平的高低與H3K9ac和H3K14ac蛋白表達(dá)情況的相關(guān)性。結(jié)果1. 激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：UHRF2與H3、H3K9ac和H3K14ac在HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞內(nèi)均有存在共定位現(xiàn)象。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:UHRF2與H3K9ac在上述細(xì)胞中相結(jié)合存在相互作用。2. 免疫沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在HEK293、LO2和HepG2細(xì)胞中PHD結(jié)構(gòu)域是UHRF2與H3K9ac相互作用的關(guān)鍵結(jié)合區(qū)域,此外在HepG2細(xì)胞中除了PHD結(jié)構(gòu)域外,YDG結(jié)構(gòu)域也是UHRF2與H3K9ac相互作用關(guān)鍵結(jié)合區(qū)域。3. 免疫印跡結(jié)果顯示：H3K9ac和H3K14ac在HepG2肝癌細(xì)胞中高表達(dá)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：UHRF2、H3K9ac和H3K14ac在肝癌組織中高表達(dá)。4. Western blot結(jié)果表明：上調(diào)UHRF2后,在HEK293和L02正常細(xì)胞中H3K9ac蛋白表達(dá)增多,而在HepG2肝癌細(xì)胞中H3K9ac蛋白表達(dá)減少。同時(shí)免疫組織化學(xué)結(jié)果表明：H3K9ac蛋白在高表達(dá)UHRF2的肝癌組織較低表達(dá)UHRF2的肝癌組織少。結(jié)論UHRF2通過其PHD結(jié)構(gòu)域與H3K9ac相互作用。在HepG2肝癌細(xì)胞中,過表達(dá)UHRF2下調(diào)H3K9ac蛋白的表達(dá)水平。UHRF2調(diào)節(jié)H3K9ac的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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