本文關鍵詞：Kiss-1對結(jié)腸癌SW480細胞增殖和遷移的影響

  更多相關文章： 結(jié)腸癌 Kiss-1 增殖 遷移

【摘要】：目的:本實驗通過構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染至結(jié)腸癌SW480細胞株,G418篩選獲得穩(wěn)定表達的細胞株,檢測Kiss-1基因?qū)Y(jié)腸癌SW480細胞增殖及遷移能力的影響,分析其與結(jié)腸癌SW480細胞生物學特性的影響,為Kiss-1在結(jié)腸癌防治作用提供理論依據(jù)。方法:構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,將Kiss-1基因?qū)虢Y(jié)腸癌SW480細胞,經(jīng)G418抗性篩選構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,篩選4周后在熒光顯微鏡下觀察細胞轉(zhuǎn)染情況。將SW480細胞設為空白對照組,將轉(zhuǎn)染p EGFP-N1空載體質(zhì)粒的SW480細胞設為陰性對照組,將轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒的SW480細胞設為實驗組。采用Western blotting法檢測各組細胞中Kiss-1基因編碼的蛋白(Kisspeptin)表達量;采用Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)法檢測各組細胞的數(shù)量,分析Kiss-1對SW480細胞增殖的影響;采用細胞劃痕實驗(Scratch wound healing assay)檢測Kiss-1對SW480細胞遷移能力的影響。結(jié)果:1.構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核表達質(zhì)粒,目的基因經(jīng)BLAST基因測序顯示合成序列與Gen Bank中Kiss-1 c DNA序列完全吻合,表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2.Lipofectamine 2000介導p EGFP-N1和p EGFP-N1-Kiss-1轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細胞,經(jīng)G418抗性篩選,熒光顯微鏡下觀察細胞可見陰性對照組和實驗組細胞恒定表達綠色熒光蛋白。結(jié)果提示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株構(gòu)建成功。3.提取各組細胞的總蛋白,Western blotting檢測各組細胞中Kiss-1基因編碼的蛋白表達量,實驗組SW480細胞Kisspeptin表達量較空白對照組及陰性對照組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)果提示Kiss-1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,SW480細胞Kisspeptin表達增加。4.CCK8實驗顯示實驗組SW480細胞的細胞數(shù)明顯低于相同時間點(24h,48h,72h)空白對照組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480細胞增殖能力。5.細胞劃痕實驗顯示:劃痕后24小時實驗組細胞遷移率(8.1%±5.5%)低于空白對照組(26.6%±11.4%)和陰性對照組(33.6%±8.7%),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);同樣,48小時實驗組細胞遷移率(13.6%±5.7%)低于空白對照組(55.5%±14.2%)和陰性對照組(50.5%±10.0%),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480細胞遷移率。結(jié)論:Kiss-1可抑制結(jié)腸癌SW480細胞的增殖,降低細胞遷移率,Kiss-1基因參與了結(jié)腸癌細胞發(fā)生與轉(zhuǎn)移的調(diào)控。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王艷;;KISS-1基因在食管癌組織中表達的臨床意義[J];胃腸病學和肝病學雜志;2014年04期

，

本文編號：1253247