本文關(guān)鍵詞：Kiss-1對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和遷移的影響

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【摘要】：目的:本實驗通過構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染至結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,檢測Kiss-1基因?qū)Y(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖及遷移能力的影響,分析其與結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,為Kiss-1在結(jié)腸癌防治作用提供理論依據(jù)。方法:構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,將Kiss-1基因?qū)虢Y(jié)腸癌SW480細(xì)胞,經(jīng)G418抗性篩選構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,篩選4周后在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。將SW480細(xì)胞設(shè)為空白對照組,將轉(zhuǎn)染p EGFP-N1空載體質(zhì)粒的SW480細(xì)胞設(shè)為陰性對照組,將轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒的SW480細(xì)胞設(shè)為實驗組。采用Western blotting法檢測各組細(xì)胞中Kiss-1基因編碼的蛋白(Kisspeptin)表達(dá)量;采用Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)法檢測各組細(xì)胞的數(shù)量,分析Kiss-1對SW480細(xì)胞增殖的影響;采用細(xì)胞劃痕實驗(Scratch wound healing assay)檢測Kiss-1對SW480細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:1.構(gòu)建p EGFP-N1-Kiss-1重組真核表達(dá)質(zhì)粒,目的基因經(jīng)BLAST基因測序顯示合成序列與Gen Bank中Kiss-1 c DNA序列完全吻合,表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2.Lipofectamine 2000介導(dǎo)p EGFP-N1和p EGFP-N1-Kiss-1轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,經(jīng)G418抗性篩選,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞可見陰性對照組和實驗組細(xì)胞恒定表達(dá)綠色熒光蛋白。結(jié)果提示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建成功。3.提取各組細(xì)胞的總蛋白,Western blotting檢測各組細(xì)胞中Kiss-1基因編碼的蛋白表達(dá)量,實驗組SW480細(xì)胞Kisspeptin表達(dá)量較空白對照組及陰性對照組增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果提示Kiss-1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,SW480細(xì)胞Kisspeptin表達(dá)增加。4.CCK8實驗顯示實驗組SW480細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)明顯低于相同時間點(24h,48h,72h)空白對照組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480細(xì)胞增殖能力。5.細(xì)胞劃痕實驗顯示:劃痕后24小時實驗組細(xì)胞遷移率(8.1%±5.5%)低于空白對照組(26.6%±11.4%)和陰性對照組(33.6%±8.7%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);同樣,48小時實驗組細(xì)胞遷移率(13.6%±5.7%)低于空白對照組(55.5%±14.2%)和陰性對照組(50.5%±10.0%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480細(xì)胞遷移率。結(jié)論:Kiss-1可抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖,降低細(xì)胞遷移率,Kiss-1基因參與了結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生與轉(zhuǎn)移的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王艷;;KISS-1基因在食管癌組織中表達(dá)的臨床意義[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2014年04期

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本文編號：1253247