發(fā)布時(shí)間：2017-12-04 19:20

  本文關(guān)鍵詞：厚樸酚抑制人胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：胰腺癌是一種惡性程度極高、治療困難的消化系統(tǒng)腫瘤。臨床上80%以上的胰腺癌患者在確診時(shí)即為中晚期且多伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,從而失去最佳手術(shù)時(shí)機(jī)。據(jù)資料顯示胰腺癌5年生存率低于1%,預(yù)后極差。因此,化療成為治療中晚期胰腺癌的主要手段。然而目前常用的化療藥物反應(yīng)率并不高,且毒副作用較大。故臨床上急需尋找新型有效低毒的抗胰腺癌藥。厚樸酚是從植物厚樸樹(shù)的皮、根、莖中提取出的烯丙基連苯二酚類天然化合物,與和厚樸酚互為同分異構(gòu)體。厚樸酚不但有中樞神經(jīng)抑制作用,抗菌,抗病原微生物,抗?jié)冏饔?而且還具有抗炎,抗氧化,抗腫瘤,抑制血小板聚集等藥理作用。此外,研究發(fā)現(xiàn)厚樸酚可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,還能夠誘發(fā)細(xì)胞自噬,負(fù)向調(diào)控血管生成,從而抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖。目的為了探究厚樸酚治療胰腺癌的臨床意義,在本研究中我們探討厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株增殖、凋亡和周期的影響以及厚樸酚體外抗胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移活性的功能,同時(shí)還研究了厚樸酚體外抗胰腺癌的機(jī)制。方法(1)CCK-8檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1,CFPAC-1,ASPC-1,MIAPa Ca-2)增殖的影響。(2)Hochest染色法檢測(cè)不同濃度厚樸酚(0,40,80,120μmol/L)對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株凋亡的影響。(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株凋亡發(fā)生率的影響。(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株周期的影響。(5)細(xì)胞基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株粘附力作用。(6)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株遷移能力作用。(7)Transwell小室重建基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株侵襲力作用。(8)Western bloting法檢測(cè)厚樸酚對(duì)組織蛋白酶D(CTSD)蛋白表達(dá)的影響。(9)不同濃度厚樸酚處理MIAPa Ca-2細(xì)胞24h后,用Caspase-3分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性。(10)CTSD抑制劑(pepstatin A)預(yù)處理MIAPa Ca-2細(xì)胞24h后應(yīng)用厚樸酚(40μmol/L)再次作用胰腺癌MIAPa Ca-2細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)厚樸酚及pepstatin A對(duì)胰腺癌MIAPa Ca-2細(xì)胞凋亡的影響。(11)pepstatin A(100μmol/L)預(yù)處理MIAPa Ca-2細(xì)胞24h后應(yīng)用厚樸酚(40μmol/L)再次處理胰腺癌MIAPa Ca-2細(xì)胞,用Caspase-3分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性變化。結(jié)果(1)不同劑量厚樸酚作用于四種胰腺癌細(xì)胞24 h,48 h,72 h后,均能抑制細(xì)胞的增殖作用,且厚樸酚在體外能以劑量和時(shí)間依賴方式抑制四種胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。(2)Hochest33258染色和流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)厚樸酚能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡、阻滯細(xì)胞周期的S期。(3)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)了厚樸酚具有抑制胰腺癌細(xì)胞的粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。(4)Western bolting法檢測(cè)厚樸酚作用胰腺癌細(xì)胞后,其胞漿中CTSD的表達(dá)明顯增多。再次利用CTSD抑制劑(pepstatin A)和厚樸酚作用胰腺癌細(xì)胞后,用Caspase-3分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3含量的改變,其胞漿中的Caspase-3蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比并未發(fā)生明顯變化,進(jìn)一步證明了厚樸酚誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制是上調(diào)CTSD的表達(dá),誘發(fā)Caspase-3的活化,最終誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡。結(jié)論厚樸酚對(duì)人四種胰腺癌細(xì)胞株不僅具有明顯抑制增殖、促進(jìn)凋亡的作用,而且減弱了胰腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。同時(shí),厚樸酚誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能是啟動(dòng)CTSD參與細(xì)胞凋亡途徑,上調(diào)CTSD的表達(dá),誘發(fā)Caspase-3的活化,最終誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9

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9 朱sヨ，

本文編號(hào)：1252075