本文關(guān)鍵詞：α-苦瓜素抗人乳腺癌效應(yīng)研究

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【摘要】：背景α-苦瓜素(Alpha-momorchain,α-MMC)是從苦瓜籽中提取分離的一種核糖體失活蛋白,能專(zhuān)一地水解真核細(xì)胞核糖體28S r RNA第A(yíng)4324位上的腺嘌呤堿基與核糖之間的N-C糖苷鍵,釋放出1個(gè)腺嘌呤堿基,阻遏延長(zhǎng)因子EF-2與核糖體的結(jié)合,從而抑制蛋白質(zhì)的合成。α-苦瓜素具有抗腫瘤、抗病毒、抗真菌、抗生育及免疫調(diào)節(jié)等作用。研究表明,α-苦瓜素對(duì)絨毛膜癌細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞等有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,但對(duì)其抗腫瘤機(jī)制、體內(nèi)抗腫瘤藥效學(xué)和毒副反應(yīng)等研究相對(duì)偏少且不夠深入。雖然α-MMC具有良好的抗腫瘤效果,但它畢竟是一種植物毒素,屬于異源蛋白,并有研究證明其在體內(nèi)使用時(shí)具有較高的藥物毒性。α-MMC的藥物毒性將會(huì)影響其臨床應(yīng)用。已報(bào)道的關(guān)于α-MMC等核糖體失活蛋白的藥效學(xué)研究多是在體外開(kāi)展的,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)較少,對(duì)于其毒副反應(yīng)對(duì)其藥物治療的影響研究不多。這些毒副反應(yīng)對(duì)藥物治療的影響有多大是值得我們探討的問(wèn)題。如若α-MMC沒(méi)有治療窗,其最低有效劑量即為最小中毒劑量,將不利于該藥進(jìn)入臨床使用。目的通過(guò)α-MMC的抗人乳腺癌體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)掌握其抗腫瘤效果并初步探討抗腫瘤機(jī)制,尋找α-MMC的最低有效劑量及最小中毒劑量(即治療窗),以便更好的評(píng)價(jià)該藥物的臨床應(yīng)用安全性。方法本研究采用MTT法了解α-MMC對(duì)人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231、MDA-MB-453和MCF-7)體外細(xì)胞毒性。利用相差倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀(guān)察經(jīng)α-MMC處理后的人乳腺癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)α-MMC處理后的人乳腺癌細(xì)胞凋亡程度及其對(duì)細(xì)胞周期的影響。檢測(cè)α-MMC處理后的人乳腺癌細(xì)胞Caspase-3活性情況。構(gòu)建Balb/c裸小鼠移植瘤模型觀(guān)察α-MMC體內(nèi)抗人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞株的效果,并通過(guò)設(shè)置不同的劑量(0.53mg/kg、0.80 mg/kg、1.20 mg/kg)以獲得藥物的最低有效劑量,即治療窗的下線(xiàn)。同時(shí)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行HE染色和TUNEL染色,觀(guān)察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡情況。對(duì)未接種腫瘤的Balb/c小鼠以不同劑量的α-MMC(1.80 mg/kg、1.20 mg/kg、0.80 mg/kg、0.53 mg/kg和0.35 mg/kg)體內(nèi)連續(xù)給藥,觀(guān)察α-MMC對(duì)小鼠的毒性,從而獲得α-MMC對(duì)小鼠的最低中毒劑量,以獲得治療窗的上限。結(jié)果(1)α-MMC對(duì)體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231、MCF-7及MDA-MB-453)皆有較好的生長(zhǎng)抑制作用,呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。α-MMC對(duì)其IC50分別為15.07μg/m L,33.66μg/m L,42.94μg/m L。(2)α-MMC可誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞凋亡,呈現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)密度增加,核質(zhì)濃縮,核膜核仁破碎等凋亡特征。經(jīng)Hoechst 33258染色熒光顯微鏡觀(guān)察到致密濃染的黃綠色細(xì)胞核以及核碎裂的凋亡小體(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明α-MMC誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞凋亡程度呈劑量依賴(lài)性,210μg/m L劑量的α-MMC誘導(dǎo)MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-453早期凋亡細(xì)胞所占比例分別為22.7%、23.2%、16.0%,晚期凋亡/死亡細(xì)胞所占比例分別為19.2%、38.0%、9.4%。(4)α-MMC皆能升高三種乳腺癌細(xì)胞的Caspase-3活性,并呈現(xiàn)明顯的劑量依賴(lài)性。MDA-MB-231細(xì)胞周期被α-MMC阻滯于G0/G1期,MDA-MB-453、MCF-7細(xì)胞周期被阻滯于G2/M期。(5)α-MMC對(duì)BALB/c小鼠的最小中毒劑量為1.20 mg/kg。(6)1.20 mg/kg和0.80 mg/kg劑量的α-MMC能明顯抑制乳腺癌移植瘤的生長(zhǎng)并起到治療作用,其最小有效劑量為0.80 mg/kg。(7)腫瘤組織的TUNEL染色顯示α-MMC促使MDA-MB-231和MCF-7腫瘤組織產(chǎn)生細(xì)胞凋亡,凋亡程度呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。結(jié)論α-MMC在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出明顯的抗人乳腺癌活性。α-MMC通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗人乳腺癌作用。α-MMC對(duì)小鼠抗人乳腺癌的治療窗為0.80 mg/kg~1.20mg/kg,顯示非常窄的體內(nèi)用藥安全范圍。
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1247423