本文關(guān)鍵詞：馬錢子堿對人肺癌細胞株P(guān)C-9凋亡及周期影響的研究

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【摘要】：目的:1、觀察馬錢子堿對人肺癌細胞株P(guān)C-9生長和增殖的影響;2、采用Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測馬錢子堿對人肺癌細胞株P(guān)C-9凋亡的影響,并初步探討其機制;3、采用PI染色法觀檢測馬錢子堿對人肺癌細胞株P(guān)C-9周期的影響,并初步探討其機制。方法:1、以人肺癌細胞株P(guān)C-9為研究對象,將其分為4組:空白對照組、DMSO對照組(2‰)、150μM馬錢子堿組、300μM馬錢子堿組,體外培養(yǎng)PC-9細胞,采用Cell Titer-Glo發(fā)光法、平板克隆形成實驗及Ed U(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)摻入法觀察該藥對PC-9細胞生長和增殖的影響;2、采用AnnexinV-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測各組體外培養(yǎng)細胞凋亡率,PI單染法檢測各組PC-9細胞周期比例;3、采用RT-PCR法檢測馬錢子堿對各組體外培養(yǎng)細胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 m RNA表達水平的影響,采用實時熒光定量PCR法(q RT-PCR)檢測各組細胞周期相關(guān)基因Cyclin D1、Cyclin E m RNA的表達水平,蛋白印跡法(Western blotting)檢測細胞凋亡及周期相關(guān)基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cyclin D1、Cyclin E蛋白的表達。結(jié)果:1、馬錢子堿可以抑制人肺癌細胞株P(guān)C-9的生長和增殖,并呈時間-濃度依賴性,且與對照組相比,各組差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Cell Titer-Glo發(fā)光法顯示:高濃度馬錢子堿組(800μM)在24h、48h、72h對PC-9細胞抑制率分別達到了63%、89%、96%;平板克隆形成實驗結(jié)果顯示:150μM馬錢子堿組、300μM馬錢子堿組抑制PC-9細胞克隆形成率分別為58%、88%;Ed U摻入法結(jié)果顯示:150μM馬錢子堿組、300μM馬錢子堿組抑制PC-9細胞Ed U陽性率(%)分別為:18%、55%。2、流式結(jié)果顯示馬錢子堿可以誘導PC-9細胞凋亡,且與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);PI染色法結(jié)果顯示馬錢子堿對細胞周期的影響主要是阻滯PC-9細胞于G0/G1期,與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);3、RT-PCR、q RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示:隨著馬錢子堿濃度的增加,抗凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白表達明顯降低,,而促凋亡基因Bax、Caspase-3 m RNA和蛋白表達均明顯升高;而細胞周期相關(guān)基因Cyclin D1、Cyclin E m RNA和蛋白的表達水平則隨著馬錢子堿濃度的提高而降低。結(jié)論:1、馬錢子堿可以抑制人肺癌細胞株P(guān)C-9的生長和增殖;2、馬錢子堿可以誘導人肺癌細胞株P(guān)C-9凋亡,其分子機制可能與激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡調(diào)控基因有關(guān);3、馬錢子堿阻滯人肺癌細胞株P(guān)C-9于G0/G1期,機制主要與其通過下調(diào)Cyclin D1、Cyclin E表達有關(guān)。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：1244423