本文關(guān)鍵詞：癌基因RMP在食管鱗癌中的表達及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及EMT相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:通過檢測RMP在人食管鱗癌組織及食管鱗癌細胞系中的表達水平,并建立RMP過表達及干擾細胞株,探究RMP對食管鱗癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移及EMT的影響。方法:1.應用qRT-PCR,Western blot實驗分別測定RMP在人食管鱗癌組織及相應癌旁組織中mRNA和蛋白表達水平,并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。2.應用qRT-PCR,Western blot實驗分別測定RMP在食管鱗癌細胞系及正常細胞系中mRNA和蛋白表達水平。3.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)建立RMP過表達及干擾瞬時表達食管鱗癌Eca109細胞株,同時應用qRT-PCR,CCK-8實驗鑒定轉(zhuǎn)染情況,并檢測各瞬時表達細胞株中RMP mRNA的表達水平及細胞增殖水平。4.應用粘附實驗測定RMP對Eca109細胞的異質(zhì)粘附能力影響。5.應用劃痕實驗檢測RMP對Eca109細胞的遷移能力改變。6.應用Transwell侵襲遷移實驗測定RMP對Eca109細胞的侵襲遷移能力改變。7.通過Western blot實驗檢測各細胞株中EMT相關(guān)標志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等表達情況。結(jié)果:1.qRT-PCR及Western blot實驗結(jié)果表明了人食管鱗癌組織中RMP mRNA和蛋白表達水平均明顯高于相應癌旁組織,其中RMP的表達和患者的年齡、性別及腫瘤位置無關(guān),而與腫瘤組織的T-stage及淋巴結(jié)狀況有關(guān)。2.qRT-PCR及Western blot實驗結(jié)果表明:與正常細胞系相比,RMP在食管鱗癌細胞系中mRNA和蛋白均呈高表達水平。3.qRT-PCR實驗結(jié)果顯示了RMP過表達和干擾質(zhì)粒都可以在Eca109細胞中瞬時表達,且mRNA表達水平呈相應的變化。4.CCK-8試驗表明了RMP過表達能促進Eca109細胞的增殖,進一步驗證了RMP過表達及干擾瞬時表達食管鱗癌Eca109細胞株構(gòu)建成功。5.粘附實驗表明了RMP過表達能降低Eca109細胞異質(zhì)粘附能力。6.劃痕實驗表明了RMP過表達能增強Eca109細胞遷移能力。7.Transwell侵襲遷移實驗表明了RMP過表達能增強Eca109細胞侵襲遷移能力。8.Western blot實驗結(jié)果表明了RMP過表達能抑制Eca109細胞中E-cadherin的表達,同時促進N-cadherin及Vimentin的表達,而RMP干擾后這三種蛋白的表達量基本不受影響。結(jié)論:1.RMP在人食管鱗癌組織及食管鱗癌細胞系中均呈高表達水平,并結(jié)合其與患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián),說明RMP可能在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用,是一種與食管鱗癌相關(guān)的潛在的癌基因。2.RMP過表達能提高Eca109細胞的體外侵襲遷移能力,RMP干擾后這一現(xiàn)象則被抑制;RMP過表達能上調(diào)Eca109細胞中N-cadherin及Vimentin的表達量,而E-cadherin的表達量被抑制,表明了RMP過表達能促進Eca109細胞EMT的發(fā)生。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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