本文關(guān)鍵詞：癌基因RMP在食管鱗癌中的表達(dá)及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及EMT相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:通過檢測RMP在人食管鱗癌組織及食管鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平,并建立RMP過表達(dá)及干擾細(xì)胞株,探究RMP對食管鱗癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移及EMT的影響。方法:1.應(yīng)用qRT-PCR,Western blot實(shí)驗(yàn)分別測定RMP在人食管鱗癌組織及相應(yīng)癌旁組織中mRNA和蛋白表達(dá)水平,并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。2.應(yīng)用qRT-PCR,Western blot實(shí)驗(yàn)分別測定RMP在食管鱗癌細(xì)胞系及正常細(xì)胞系中mRNA和蛋白表達(dá)水平。3.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)建立RMP過表達(dá)及干擾瞬時(shí)表達(dá)食管鱗癌Eca109細(xì)胞株,同時(shí)應(yīng)用qRT-PCR,CCK-8實(shí)驗(yàn)鑒定轉(zhuǎn)染情況,并檢測各瞬時(shí)表達(dá)細(xì)胞株中RMP mRNA的表達(dá)水平及細(xì)胞增殖水平。4.應(yīng)用粘附實(shí)驗(yàn)測定RMP對Eca109細(xì)胞的異質(zhì)粘附能力影響。5.應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測RMP對Eca109細(xì)胞的遷移能力改變。6.應(yīng)用Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)測定RMP對Eca109細(xì)胞的侵襲遷移能力改變。7.通過Western blot實(shí)驗(yàn)檢測各細(xì)胞株中EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等表達(dá)情況。結(jié)果:1.qRT-PCR及Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了人食管鱗癌組織中RMP mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯高于相應(yīng)癌旁組織,其中RMP的表達(dá)和患者的年齡、性別及腫瘤位置無關(guān),而與腫瘤組織的T-stage及淋巴結(jié)狀況有關(guān)。2.qRT-PCR及Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與正常細(xì)胞系相比,RMP在食管鱗癌細(xì)胞系中mRNA和蛋白均呈高表達(dá)水平。3.qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示了RMP過表達(dá)和干擾質(zhì)粒都可以在Eca109細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),且mRNA表達(dá)水平呈相應(yīng)的變化。4.CCK-8試驗(yàn)表明了RMP過表達(dá)能促進(jìn)Eca109細(xì)胞的增殖,進(jìn)一步驗(yàn)證了RMP過表達(dá)及干擾瞬時(shí)表達(dá)食管鱗癌Eca109細(xì)胞株構(gòu)建成功。5.粘附實(shí)驗(yàn)表明了RMP過表達(dá)能降低Eca109細(xì)胞異質(zhì)粘附能力。6.劃痕實(shí)驗(yàn)表明了RMP過表達(dá)能增強(qiáng)Eca109細(xì)胞遷移能力。7.Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)表明了RMP過表達(dá)能增強(qiáng)Eca109細(xì)胞侵襲遷移能力。8.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了RMP過表達(dá)能抑制Eca109細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá),同時(shí)促進(jìn)N-cadherin及Vimentin的表達(dá),而RMP干擾后這三種蛋白的表達(dá)量基本不受影響。結(jié)論:1.RMP在人食管鱗癌組織及食管鱗癌細(xì)胞系中均呈高表達(dá)水平,并結(jié)合其與患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián),說明RMP可能在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用,是一種與食管鱗癌相關(guān)的潛在的癌基因。2.RMP過表達(dá)能提高Eca109細(xì)胞的體外侵襲遷移能力,RMP干擾后這一現(xiàn)象則被抑制;RMP過表達(dá)能上調(diào)Eca109細(xì)胞中N-cadherin及Vimentin的表達(dá)量,而E-cadherin的表達(dá)量被抑制,表明了RMP過表達(dá)能促進(jìn)Eca109細(xì)胞EMT的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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本文編號：1234986