本文關(guān)鍵詞：VentX促進(jìn)造血干細(xì)胞向紅系分化及對(duì)腫瘤干細(xì)胞分化的初探

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【摘要】：非洲爪蟾蜍xvent基因同源哺乳動(dòng)物基因VentX,作為一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的造血發(fā)育調(diào)節(jié)基因,對(duì)調(diào)控造血干細(xì)胞的增殖與分化起著重要作用,此外它還參與中胚層的分化定型、細(xì)胞衰老、細(xì)胞增殖與分化及炎癥反應(yīng)等的調(diào)節(jié)。GATA家族成員GATA-2,通過與靶基因的GATA結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,在造血系統(tǒng)發(fā)育中起關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)GATA-2可以結(jié)合到VentX啟動(dòng)子區(qū)兩個(gè)GATA結(jié)合位點(diǎn)來順式調(diào)控VentX,本文利用VentX和GATA-2的過表達(dá)載體和基因沉默的慢病毒,在從人骨髓中分離出的CD34+細(xì)胞中進(jìn)行了VentX和GATA-2 二者的過表達(dá)或沉默,通過Western bloting檢測(cè)了VentX和GATA-2的表達(dá)水平,通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和聯(lián)苯胺染色檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)考察VentX和GATA-2對(duì)CD34+細(xì)胞增殖以及向紅系分化的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CD34+細(xì)胞中過表達(dá)GATA-2或VentX均可抑制細(xì)胞增殖,提高紅系分化特異因子α-,β-珠蛋白的表達(dá),促進(jìn)CD34+細(xì)胞向紅系分化。腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cells, TSCs)理論認(rèn)為TSCs是腫瘤組織內(nèi)一小部分能夠自我更新并有能力再生腫瘤的細(xì)胞,與腫瘤的形成和生長(zhǎng)密切相關(guān),其理論從一個(gè)全新的角度詮釋了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展本質(zhì),給腫瘤的靶向性、根治性治療帶來了希望。但目前對(duì)TSCs的研究還處于初級(jí)階段,TSCs維持自我更新及無限增殖潛能的分子機(jī)制尚不清楚,影響TSCs多向分化潛能的相關(guān)因素也未得到完全闡明。鑒于TSCs與正常干細(xì)胞有諸多相似特征和VentX基因?qū)υ煅杉?xì)胞的分化調(diào)節(jié),本文進(jìn)行了VentX對(duì)腫瘤干細(xì)胞分化的初步探索。利用無血清懸浮培養(yǎng)富集腫瘤干細(xì)胞及在乳腺癌BT549細(xì)胞中過表達(dá)VentX,考察了VentX過表達(dá)與腫瘤干細(xì)胞比例的關(guān)系以及對(duì)干細(xì)胞標(biāo)志物ALDH1和干細(xì)胞分化重要因子Nanog、Oct4、TGF-β表達(dá)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在BT549細(xì)胞中,VentX的表達(dá)隨腫瘤干細(xì)胞的比例升高而增加。過表達(dá)VentX與無血清懸浮培養(yǎng)富集對(duì)ALDH1、 Nanog、Oct4、TGF-β的表達(dá)有相似的影響效果,特別是對(duì)于干細(xì)胞標(biāo)志物ALDH1,對(duì)BT549細(xì)胞的這兩種處理都可以提高ALDH1的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-3
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本文編號(hào)：1234149