本文關鍵詞：BCG-PPD對γδT細胞殺傷肺癌A549細胞作用的影響

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【摘要】：目的：研究卡介菌純蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of BCQBCG-PPD)對人外周血γδT細胞穿孔素和顆粒酶B表達的影響,并進一步探討B(tài)CG-PPD對γδT細胞殺傷肺癌A549細胞的增效作用。方法：(1)制備γδT細胞：采用Ficoll密度梯度離心法分離健康人外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),以唑來膦酸(Zoledronic acid, ZA,終濃度為5nmol/ml)及白細胞介素-2(Interleukin-2,IL-2,終濃度為200IU/ml)刺激擴增γδT細胞；(2)確定最佳效靶比例：培養(yǎng)9-14天后,用流式細胞儀測定PBMC中丫δT細胞的比例。按不同的效靶比例(Effector:target,E:T)將γδT細胞與肺癌A549細胞混合培養(yǎng),48小時后用倒置顯微鏡觀察肺癌A549細胞的生長狀態(tài),并使用乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase, LDH)細胞毒性檢測試劑盒檢測γδT細胞對肺癌A549細胞的細胞毒性,以確定最佳效靶比例。(3) BCG-PPD處理后相關指標檢測：將γδT細胞與肺癌A549細胞按最佳效靶比例混合培養(yǎng),并加入不同濃度的BCG-PPD處理,用倒置顯微鏡動態(tài)觀察細胞的生長狀況,48小時后使用LDH細胞毒性檢測試劑盒檢測γδT細胞對肺癌A549細胞的細胞毒性,使用流式細胞儀檢測γδT細胞穿孔素、顆粒酶B的表達,并用透射電鏡觀察肺癌A549細胞的形態(tài)結構變化。結果：(1)體外刺激擴增9-14天后γδT細胞濃度從初始的(4.65±4.36)%增加到(83.82±2.18)%。(2)按不同效靶比例混合培養(yǎng)γδT細胞與肺癌A549細胞時,倒置顯微鏡下可觀察到肺癌A549細胞生長狀況的差異,γδT細胞的細胞毒性作用隨效靶比例的升高而增強,最佳效靶比為20：1。(3)按20：1的效靶比例混合培養(yǎng),并加入不同濃度的BCG-PPD處理后,流式細胞儀檢測加入濃度為20IU/ml的BCG-PPD處理組γδT細胞對肺癌A549細胞的細胞毒性最強,穿孔素、顆粒酶B的表達均顯著高于未加入BCG-PPD組,倒置顯微鏡動態(tài)觀察到肺癌A549細胞的生長形態(tài)較未加入BCG-PPD組變化更為明顯,透射電鏡觀察到經γδT細胞作用后肺癌A549細胞膜完整性被破壞,核膜消失,染色質固縮、溶解。結論：從健康人外周血分離出來的γδT細胞于體外刺激擴增后,對肺癌A549細胞具有殺傷作用；BCG-PPD可增高γδT細胞穿孔素及顆粒酶B的表達,加速肺癌A549細胞形態(tài)改變,增強殺傷作用。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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