本文關(guān)鍵詞：乙�；D(zhuǎn)移酶抑制劑C646對胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制研究

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【摘要】：背景胃癌(gastric cancer, GC)是最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率居世界惡性腫瘤的第三位。隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展,胃癌的死亡率有所下降,但情況仍不容樂觀,進(jìn)展期胃癌的5年生存率僅有10-25%。因此,科研工作者需深入研究胃癌的具體分子機(jī)制,找到新的、更有效的治療胃癌的藥物。 乙酰基轉(zhuǎn)移酶(histone acetyltransferases, HAT) p300和CBP被發(fā)現(xiàn)對于細(xì)胞周期、DNA合成、細(xì)胞分化均發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。很多研究表明,在前列腺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤中,抑制p300/CBP的功能后,可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。C646是p300/CBP的小分子抑制劑,近年來被發(fā)現(xiàn)在很多腫瘤細(xì)胞中具有抑瘤活性。但其對胃癌細(xì)胞的作用很少有人研究。若能深入研究p300/CBP在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及C646對胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、遷移等生物學(xué)功能的影響及具體的分子機(jī)制,很有可能找到胃癌治療的新靶點及針對該靶點的有效藥物。目的檢測乙�；D(zhuǎn)移酶p300/CBP在正常胃黏膜細(xì)胞GES-1及5種胃癌細(xì)胞KATO Ⅲ、SGC-7901、BGC-823、MKN45、MGC-803中的表達(dá)情況；將p300/CBP的小分子抑制劑C646作用于胃癌細(xì)胞后,觀察C646對胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力、細(xì)胞周期和凋亡的影響；深入研究C646對胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的可能的分子機(jī)制。方法運(yùn)用實時熒光定量PCR技術(shù)和Western Blot法檢測正常胃黏膜細(xì)胞GES-1和5種胃癌細(xì)胞(KATO Ⅲ、SGC-7901、BGC-823、MKN45和MGC-803)中p300/CBP mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)情況。將乙酰基轉(zhuǎn)移酶p300/CBP抑制劑C646作用于正常胃黏膜細(xì)胞GES-1和5株胃癌細(xì)胞KATO Ⅲ、SGC-7901. BGC-823. MKN45和MGC-803后,通過細(xì)胞增殖檢測試劑盒CCK-8檢測p300/CBP被抑制后對于6種細(xì)胞增殖能力的影響；通過流式細(xì)胞儀檢測p300/CBP的功能被抑制后對各種細(xì)胞周期和凋亡的影響；通過劃痕實驗、transwell實驗觀察抑制p300/CBP以后對5株胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。通過熒光定量PCR技術(shù)和Western Blot法檢測C646處理胃癌細(xì)胞后,MET、AKT、p-AKT、Erk、p-Erk、BCL2、Cyclin D1、MMP7和MMP9等相關(guān)信號分子的表達(dá)變化。結(jié)果熒光定量PCR和Western Blot的結(jié)果顯示,在5種胃癌細(xì)胞中p300/CBP的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)均明顯高于正常的胃黏膜細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。將不同濃度的乙�；D(zhuǎn)移酶p300/CBP抑制劑C646作用于正常胃黏膜細(xì)胞及5種胃癌細(xì)胞后,通過CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與DMSO對照組相比,6種細(xì)胞的增殖均可被C646抑制(P0.05),以MKN45和MGC-803細(xì)胞的增殖抑制效果最為明顯,且C646對胃癌細(xì)增殖的抑制較正常胃黏膜細(xì)胞相比更加明顯。將C646作用于5種胃癌后,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡的變化,發(fā)現(xiàn)與DMSO對照組相比較,C646處理組的胃癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞周期阻滯(P0.01)和細(xì)胞凋亡(P0.05)。將C646作用于5種胃癌后,采用劃痕實驗、transwell實驗觀察細(xì)胞的遷移和侵襲情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)除SGC-7901外,其他4株胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力均明顯下降(P0.05)C646處理5種胃癌細(xì)胞后進(jìn)行Western Blot檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與DMSO組相比較,C646處理組的胃癌細(xì)胞MET、AKT、p-AKT等分子的蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)。結(jié)論乙�；D(zhuǎn)移酶p300/CBP在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常的胃黏膜細(xì)胞。用乙�；D(zhuǎn)移酶抑制劑C646抑制p300/CBP的功能后,胃癌細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞的遷移和侵襲能力均被明顯抑制,而細(xì)胞凋亡則顯著增加。并且,C646處理胃癌細(xì)胞后,MET、AKT、p-AKT等分子的蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)。綜上所述,p300/CBP可能通過致瘤分子MET及AKT通路來調(diào)控胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能,而C646可通過阻斷p300/CBP的作用從而發(fā)揮抑癌效果。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Value of c-Met for Predicting Progression of Precancerous Gastric Lesions in Rural Chinese Population[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年01期

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本文編號：1225186