本文關(guān)鍵詞：Rad51基因沉默對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞體內(nèi)外增殖能力的影響

  更多相關(guān)文章： A549細(xì)胞 Rad51 基因沉默 增殖

【摘要】：目的:本課題通過(guò)慢病毒包裝si RNA干擾抑制人肺腺癌A549細(xì)胞Rad51基因的表達(dá),研究感染前后A549細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期以及裸鼠移植瘤早期生長(zhǎng)的變化,探討Rad51基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,以期為NSCLC的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。方法:常規(guī)培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞株,針對(duì)Rad51基因序列,選取并設(shè)計(jì)RNA干擾靶點(diǎn),構(gòu)建針對(duì)Rad51基因的干擾慢病毒。實(shí)驗(yàn)分為三組:Normal組:用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞;Lenti-NC組:感染了空載體慢病毒以后的肺腺癌A549細(xì)胞;Lenti-Rad51si組:感染了Rad51si RNA慢病毒的肺腺癌A549細(xì)胞。通過(guò)熒光定量PCR(Q-PCR)測(cè)定感染前后A549細(xì)胞中的Rad51 m RNA水平;Western Blot檢測(cè)感染前后A549細(xì)胞中Rad51蛋白的表達(dá);克隆形成實(shí)驗(yàn)研究感染前后A549細(xì)胞的增殖能力;MTT法檢測(cè)感染前后A549細(xì)胞的增殖活性;FCM法分析感染前后A549細(xì)胞的細(xì)胞周期情況;裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)觀察感染前后A549細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)狀況。結(jié)果:1.由上海吉?jiǎng)P公司構(gòu)建Rad51 si RNA慢病毒質(zhì)粒,包裝后的病毒Lenti-Rad51滴度為2×108TU/ml,空載體病毒Lenti-NC滴度為8×108 TU/ml。2.Rad51 si RNA慢病毒和陰性對(duì)照慢病毒感染A549細(xì)胞后均能獲得較高的感染效率;3.Rad51 si RNA慢病毒感染A549細(xì)胞48小時(shí)后,應(yīng)用Quantitative RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè),結(jié)果顯示該組細(xì)胞株中Rad51 m RNA和蛋白表達(dá)水平均下調(diào);4.Rad51基因沉默降低A549細(xì)胞的克隆形成能力;5.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明下調(diào)的Rad51降低了A549細(xì)胞的活性;6.FCM法結(jié)果證實(shí)Rad51表達(dá)量下調(diào)能將A549細(xì)胞阻滯在G1期;7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,Rad51基因沉默后裸鼠成瘤能力下降。結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)表明Rad51 si RNA通過(guò)抑制Rad51基因的表達(dá),可誘導(dǎo)A549細(xì)胞克隆形成數(shù)量減少,細(xì)胞的活性下調(diào),將A549細(xì)胞阻滯在G1期;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明Rad51基因沉默后裸鼠成瘤的能力下降。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 彭亞婷;熊一峰;徐姍;王珊珊;梅金紅;;RAD51基因G135C單核苷酸多態(tài)性及p53突變?cè)诜伟┲械囊饬x[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2012年03期

2 張波;盧冰;蘇勝發(fā);歐陽(yáng)偉煒;胡銀祥;王剛;龍金華;果蕙芹;;Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌化療同期胸部三維放療的前瞻性臨床研究(四)——近期療效對(duì)生存的影響[J];中華放射腫瘤學(xué)雜志;2012年01期

3 周敏;戎霞君;高蓓莉;丁永杰;萬(wàn)歡英;;著色性干皮病基因組D和胞苷脫氨酶基因單核苷酸多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年10期

4 白圖雅;常福厚;王敏杰;王光;張碩;;GSTT1及CYP1A1基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2011年06期

5 邱月鋒;林勇;黃萌;陳星;何斐;樊麗輝;陳俊磊;蔡琳;;吸煙、居住環(huán)境、基因多態(tài)性與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2011年03期

6 彭亞婷;梅金紅;;Rad51與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2011年01期

7 杜利清;白劍強(qiáng);劉強(qiáng);王彥;王小春;王月英;張恒;孟愛(ài)民;樊飛躍;;抑制人RAD51基因表達(dá)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞體內(nèi)外增殖能力的影響[J];腫瘤;2010年11期

8 喬貴賓;曾偉生;彭麗君;吳一龍;;非小細(xì)胞肺癌組織Rad51高表達(dá)及其臨床意義的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2009年14期

9 陳漢春;Rad51同系物與DNA重組修復(fù)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2003年04期

，

本文編號(hào)：1219297