本文關(guān)鍵詞：人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29表達(dá)Tn抗原的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：免疫磁珠分選人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29中Tn抗原陽性(HT-29-Tn~+)細(xì)胞,探討其表達(dá)Tn抗原的機(jī)制,為結(jié)腸癌的診斷及治療提供新的靶點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。方法：培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29,胃癌細(xì)胞株BGC823和白血病細(xì)胞株.urkat T;密度梯度離心法分離正常女性外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC);免疫磁珠分選HT-29-Tn~+與HT-29-Tn細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)檢測Tn抗原表達(dá)狀況；PCR、PT-PCR擴(kuò)增Cosmc基因,測序?qū)Ρ仁欠翊嬖贑osmc基因突變及SNP位點(diǎn)；BSP法檢測Cosmc啟動(dòng)子CpG島基因的甲基化頻率；WtCosmc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染正常及腫瘤細(xì)胞；Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后Cosmc蛋白的表達(dá)狀況；熒光分析法檢測轉(zhuǎn)染前后T-synthase活性的變化。結(jié)果：HT-29-Tn~+細(xì)胞中Cosmc編碼區(qū)基因缺失,T-synthase失活；正常女性細(xì)胞中Cosmc非編碼區(qū)存在SNP位點(diǎn),CpG島甲基化頻率約50%,而在HT-29-Tn~+與HT-29-Tn-細(xì)胞中均未檢測到Cosmc非編碼區(qū)SNP位點(diǎn)及啟動(dòng)子CpG島的甲基化；Tn抗原陽性細(xì)胞(HT-29-Tn~+和Jurkat T細(xì)胞)轉(zhuǎn)染W(wǎng)tCosmc后,Tn抗原的表達(dá)量明顯下降,T-synthase活性顯著增高。結(jié)論：來源于女性結(jié)腸癌患者的HT-29細(xì)胞中Cosmc僅存在一條有活性的等位基因,而該等位基因編碼區(qū)的缺失是導(dǎo)致HT-29-Tn~+細(xì)胞T-synthase失活,Tn抗原表達(dá)的原因；WtCosmc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Tn抗原陽性細(xì)胞可恢復(fù)T-synthase的活性,抑制其Tn抗原的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35

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