人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29表達(dá)Tn抗原的機制研究
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更多相關(guān)文章: HT-29細(xì)胞 Cosmc T-synthase 甲基化 腫瘤
【摘要】:目的:免疫磁珠分選人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29中Tn抗原陽性(HT-29-Tn~+)細(xì)胞,探討其表達(dá)Tn抗原的機制,為結(jié)腸癌的診斷及治療提供新的靶點及實驗理論依據(jù)。方法:培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29,胃癌細(xì)胞株BGC823和白血病細(xì)胞株.urkat T;密度梯度離心法分離正常女性外周血單個核細(xì)胞(PBMC);免疫磁珠分選HT-29-Tn~+與HT-29-Tn細(xì)胞;流式細(xì)胞術(shù)檢測Tn抗原表達(dá)狀況;PCR、PT-PCR擴增Cosmc基因,測序?qū)Ρ仁欠翊嬖贑osmc基因突變及SNP位點;BSP法檢測Cosmc啟動子CpG島基因的甲基化頻率;WtCosmc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染正常及腫瘤細(xì)胞;Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后Cosmc蛋白的表達(dá)狀況;熒光分析法檢測轉(zhuǎn)染前后T-synthase活性的變化。結(jié)果:HT-29-Tn~+細(xì)胞中Cosmc編碼區(qū)基因缺失,T-synthase失活;正常女性細(xì)胞中Cosmc非編碼區(qū)存在SNP位點,CpG島甲基化頻率約50%,而在HT-29-Tn~+與HT-29-Tn-細(xì)胞中均未檢測到Cosmc非編碼區(qū)SNP位點及啟動子CpG島的甲基化;Tn抗原陽性細(xì)胞(HT-29-Tn~+和Jurkat T細(xì)胞)轉(zhuǎn)染W(wǎng)tCosmc后,Tn抗原的表達(dá)量明顯下降,T-synthase活性顯著增高。結(jié)論:來源于女性結(jié)腸癌患者的HT-29細(xì)胞中Cosmc僅存在一條有活性的等位基因,而該等位基因編碼區(qū)的缺失是導(dǎo)致HT-29-Tn~+細(xì)胞T-synthase失活,Tn抗原表達(dá)的原因;WtCosmc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Tn抗原陽性細(xì)胞可恢復(fù)T-synthase的活性,抑制其Tn抗原的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】:濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R735.35
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,本文編號:1216191
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