本文關(guān)鍵詞：BrMC對(duì)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系干樣細(xì)胞特性的影響

  更多相關(guān)文章： 肝癌干樣細(xì)胞 肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞 8-溴-7-甲氧基白楊素 NF-κB

【摘要】：目的:研究8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin,Br MC)對(duì)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極化表型以及肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞系細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)、遷移和侵襲等特性的影響,并探討B(tài)r MC調(diào)節(jié)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞NF-κB表達(dá)與其逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極化表型和抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系肝癌干樣細(xì)胞特性之間的關(guān)聯(lián)性。方法:SMMC-7721細(xì)胞系第3代球形成細(xì)胞鑒定作為肝癌干樣細(xì)胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)模型,并收集LCSLCs條件培養(yǎng)基(LCSLC-CM)。以佛波酯(Phorbol Myristate Acetate,PMA)活化的體外培養(yǎng)人THP-1單核細(xì)胞系細(xì)胞為THP-1源性巨噬細(xì)胞,用LCSLC-CM處理的THP-1源性巨噬細(xì)胞作為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞或者在Ttranswell小室與LCSLCs共培養(yǎng)系統(tǒng)中活化THP-1源性巨噬細(xì)胞為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞。LPS與INF-γ處理THP-1源性巨噬細(xì)胞作為經(jīng)典活化M1型巨噬細(xì)胞對(duì)照。不同濃度Br MC(0、5、10、20μmol/L)處理LCSLCs或LCSLCs/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)觀察藥物干預(yù)效應(yīng)。NF-κB特異性抑制劑SN50用于探討B(tài)r MC藥理作用機(jī)制。比較腫瘤球形成率測(cè)定細(xì)胞自我更新能力,Western blot分析干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和CD44蛋白的表達(dá),劃痕法和Transwell小室侵襲試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力。細(xì)胞免疫熒光染色和Western-blot分析巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD68和M2型巨噬細(xì)胞即肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD163表達(dá)。ELISA測(cè)定肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基細(xì)胞因子IL-10、IL-12、VEGF、MMP-9濃度;Griess法測(cè)定培養(yǎng)基NO水平。結(jié)果:1.與親本細(xì)胞相比,第3代人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞系球形成細(xì)胞高表達(dá)CD133和CD44干細(xì)胞標(biāo)志蛋白,更高腫瘤球形成率,具有肝癌干樣細(xì)胞特性。2.LCSLC-CM或與肝癌干樣細(xì)胞共培養(yǎng)能有效誘導(dǎo)體外培養(yǎng)THP-1源巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞。與M1型巨噬細(xì)胞相比,肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)CD163蛋白;細(xì)胞分泌譜為IL-10high、IL-12low、VEGF high、MMP-9 high;且NO釋放減少,呈現(xiàn)出M2型巨噬細(xì)胞極化表型。3.肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基有效誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)、體外細(xì)胞遷移和侵襲。4.Br MC以濃度依賴方式降低肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞CD163表達(dá),逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子分泌譜。5.Br MC以濃度依賴方式抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞CD133和CD44蛋白表達(dá),腫瘤球形成和體外細(xì)胞遷移和侵襲作用(P0.05)。6.特異性NF-κB抑制劑SN50以濃度依賴方式降低肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平(P0.05);同時(shí),SN50與Br MC協(xié)同拮抗肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)、體外細(xì)胞遷移和侵襲作用。結(jié)論:1.肝癌干樣細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)促成THP-1源性巨噬細(xì)胞M2型極化。2.肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)、遷移與侵襲等肝癌干樣細(xì)胞特性。3.Br MC具有逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2極化表型作用。4.Br MC具有抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞肝癌干樣細(xì)胞特性作用。5.Br MC逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2極化表型和抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系干樣細(xì)胞特性作用機(jī)制涉及其下調(diào)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞NF-κB(p65)蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1209711