本文關鍵詞：BrMC對肝癌相關巨噬細胞誘導SMMC-7721細胞系干樣細胞特性的影響

  更多相關文章： 肝癌干樣細胞 肝癌相關巨噬細胞 8-溴-7-甲氧基白楊素 NF-κB

【摘要】：目的:研究8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin,Br MC)對肝癌相關巨噬細胞極化表型以及肝癌相關巨噬細胞誘導人肝細胞癌SMMC-7721細胞系細胞自我更新、干細胞標志物表達、遷移和侵襲等特性的影響,并探討B(tài)r MC調(diào)節(jié)肝癌相關巨噬細胞NF-κB表達與其逆轉(zhuǎn)肝癌相關巨噬細胞極化表型和抑制肝癌相關巨噬細胞誘導SMMC-7721細胞系肝癌干樣細胞特性之間的關聯(lián)性。方法:SMMC-7721細胞系第3代球形成細胞鑒定作為肝癌干樣細胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)模型,并收集LCSLCs條件培養(yǎng)基(LCSLC-CM)。以佛波酯(Phorbol Myristate Acetate,PMA)活化的體外培養(yǎng)人THP-1單核細胞系細胞為THP-1源性巨噬細胞,用LCSLC-CM處理的THP-1源性巨噬細胞作為肝癌相關巨噬細胞或者在Ttranswell小室與LCSLCs共培養(yǎng)系統(tǒng)中活化THP-1源性巨噬細胞為肝癌相關巨噬細胞。LPS與INF-γ處理THP-1源性巨噬細胞作為經(jīng)典活化M1型巨噬細胞對照。不同濃度Br MC(0、5、10、20μmol/L)處理LCSLCs或LCSLCs/THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)觀察藥物干預效應。NF-κB特異性抑制劑SN50用于探討B(tài)r MC藥理作用機制。比較腫瘤球形成率測定細胞自我更新能力,Western blot分析干細胞標志物CD133和CD44蛋白的表達,劃痕法和Transwell小室侵襲試驗檢測細胞遷移和侵襲能力。細胞免疫熒光染色和Western-blot分析巨噬細胞表面標志蛋白CD68和M2型巨噬細胞即肝癌相關巨噬細胞表面標志蛋白CD163表達。ELISA測定肝癌相關巨噬細胞條件培養(yǎng)基細胞因子IL-10、IL-12、VEGF、MMP-9濃度;Griess法測定培養(yǎng)基NO水平。結果:1.與親本細胞相比,第3代人肝細胞癌SMMC-7721細胞系球形成細胞高表達CD133和CD44干細胞標志蛋白,更高腫瘤球形成率,具有肝癌干樣細胞特性。2.LCSLC-CM或與肝癌干樣細胞共培養(yǎng)能有效誘導體外培養(yǎng)THP-1源巨噬細胞轉(zhuǎn)分化為肝癌相關巨噬細胞。與M1型巨噬細胞相比,肝癌相關巨噬細胞高表達CD163蛋白;細胞分泌譜為IL-10high、IL-12low、VEGF high、MMP-9 high;且NO釋放減少,呈現(xiàn)出M2型巨噬細胞極化表型。3.肝癌相關巨噬細胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細胞/THP-1源巨噬細胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基有效誘導SMMC-7721細胞自我更新、干細胞標志蛋白表達、體外細胞遷移和侵襲。4.Br MC以濃度依賴方式降低肝癌相關巨噬細胞CD163表達,逆轉(zhuǎn)肝癌相關巨噬細胞M2型巨噬細胞極化相關細胞因子分泌譜。5.Br MC以濃度依賴方式抑制肝癌相關巨噬細胞條件培養(yǎng)基誘導SMMC-7721細胞CD133和CD44蛋白表達,腫瘤球形成和體外細胞遷移和侵襲作用(P0.05)。6.特異性NF-κB抑制劑SN50以濃度依賴方式降低肝癌相關巨噬細胞NF-κB(p65)蛋白表達水平(P0.05);同時,SN50與Br MC協(xié)同拮抗肝癌相關巨噬細胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細胞/THP-1源巨噬細胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導SMMC-7721細胞自我更新、干細胞標志蛋白表達、體外細胞遷移和侵襲作用。結論:1.肝癌干樣細胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細胞/THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng)促成THP-1源性巨噬細胞M2型極化。2.肝癌相關巨噬細胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細胞/THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導SMMC-7721細胞系細胞自我更新、干細胞標志物表達、遷移與侵襲等肝癌干樣細胞特性。3.Br MC具有逆轉(zhuǎn)肝癌相關巨噬細胞M2極化表型作用。4.Br MC具有抑制肝癌相關巨噬細胞誘導SMMC-7721細胞肝癌干樣細胞特性作用。5.Br MC逆轉(zhuǎn)肝癌相關巨噬細胞M2極化表型和抑制肝癌相關巨噬細胞誘導SMMC-7721細胞系干樣細胞特性作用機制涉及其下調(diào)肝癌相關巨噬細胞NF-κB(p65)蛋白表達。
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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