本文關(guān)鍵詞：miRNA-429對(duì)人乳腺癌Bcap37細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控及相關(guān)研究

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【摘要】：一、研究背景和目的乳腺癌是一種異質(zhì)性的疾病,居女性腫瘤相關(guān)死亡率第二位,包括了大量各種不同的臨床特征。在過去的十年中,大量研究證實(shí)乳腺癌可分為多個(gè)分子亞型:luminal A亞型、luminal B亞型、HER2過表達(dá)亞型、基底細(xì)胞樣亞型和正常細(xì)胞樣亞型或更多分子亞型[1,2]。其中,Luminal亞型的基因表達(dá)主要與雌激素受體(ER)和/或孕激素受體(PR)陽(yáng)性的表達(dá)相關(guān);HER2過表達(dá)亞型表現(xiàn)為HER2受體的過表達(dá)以及鄰近基因17q12 21的擴(kuò)增;基底樣亞型是由基底/肌上皮標(biāo)記表達(dá)來定義且普遍缺乏ER、PR和HER2的表達(dá)。重要的是,不同分子亞型有特定的m RNA表達(dá)譜,這些特定的m RNA表達(dá)譜部分歸因于不同的mi RNA的表達(dá)[3]。有研究通過將乳腺癌與癌旁組織進(jìn)行對(duì)比,揭示了乳腺癌組織中mi RNA失調(diào)的普遍模式,提示了在乳腺癌的發(fā)展中mi RNA失調(diào)的重要性[4]。mi R-429屬于一個(gè)mi RNA家族,該家族包括mi R-200c、mi R-141、mi R-200b和mi R-200a[5]。mi R-429在生物體內(nèi)發(fā)揮著正常的生物學(xué)功能[6,7],特異性地表達(dá)于人類胚胎干細(xì)胞中[8],但同時(shí)其異常表達(dá)也參與影響腫瘤干細(xì)胞和各種腫瘤的功能[9-13],但其在乳腺癌中的表達(dá)情況及功能情況尚未見報(bào)道。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)在人乳腺癌Bcap37細(xì)胞系中mi R-429的表達(dá)低,進(jìn)一步的研究表明mi R-429的過表達(dá)促進(jìn)人乳腺癌Bcap37細(xì)胞的增殖和遷移,進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。二、研究方法1.利用Realtime-PCR探針法檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞系BT20、BT474、Bcap37、SK-BR-3、MCF7、T-47D和MDA-MB-231中mi R-429的表達(dá)情況,從中選擇出mi R-429表達(dá)最低的細(xì)胞系;2.通過Hsa-mi R-429過表達(dá)慢病毒和對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染Bcap37乳腺癌細(xì)胞,建立穩(wěn)定過表達(dá)mi R-429的人乳腺癌細(xì)胞系Bcap37及其對(duì)照細(xì)胞系;3.利用RT-PCR探針法檢測(cè)過表達(dá)mi R-429的人乳腺癌細(xì)胞系Bcap37及其對(duì)照細(xì)胞系中mi R-429的表達(dá)情況,確定轉(zhuǎn)染效率;4.穩(wěn)定過表達(dá)mi R-429的人乳腺癌細(xì)胞系Bcap37及其對(duì)照細(xì)胞系分別采用MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等方法觀察表達(dá)mi R-429后對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系Bcap37增殖、遷移、轉(zhuǎn)移能力等生物學(xué)特性的影響;5.利用Realtime-PCR探針法檢測(cè)穩(wěn)定過表達(dá)mi R-429的人乳腺癌細(xì)胞系Bcap37及其對(duì)照細(xì)胞系對(duì)Shp2、FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相關(guān)m RNA轉(zhuǎn)錄水平的影響。三、研究結(jié)果1.利用Realtime-PCR探針法檢測(cè)結(jié)果顯示:mi R-429在乳腺癌細(xì)胞系都有不同程度表達(dá),BT20和T47D細(xì)胞系表達(dá)量最高,BT474、、SK-BR-3、MCF7和MDA-MB-231細(xì)胞系表達(dá)量相當(dāng),而mi R-429在Bcap37細(xì)胞中表達(dá)量最低;2.將hsa-mi R-429過表達(dá)慢病毒感染人乳腺癌Bcap37細(xì)胞,經(jīng)篩選后得到hsa-mi R-429過表達(dá)Bcap37穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。利用Realtime-PCR探針法檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,hsa-mi R-429過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)Bcap37細(xì)胞株中mi R-429的表達(dá)水平顯著增加;3.MTT法檢測(cè)Mi R-429過表達(dá)處理對(duì)細(xì)胞增值的影響。培養(yǎng)24h、48h、72h后,Bcap37細(xì)胞過表達(dá)Mi R-429組的在490nm處的吸光度均明顯高于與對(duì)照組,說明mi R-429能顯著促進(jìn)Bcap37細(xì)胞的增殖;4.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,與對(duì)照組相比,hsa-mi R-429過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)Bcap37細(xì)胞株的遷移能力顯著增強(qiáng);Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)得到與上述類似的結(jié)果;5.乳腺癌相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的差異:hsa-mi R-429過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)Bcap37細(xì)胞株中Shp2的相對(duì)表達(dá)水平高于對(duì)照組,而FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相關(guān)m RNA轉(zhuǎn)錄水平均低于對(duì)照組。四、結(jié)論目前研究表明,mi RNA與家族性乳腺癌、雌激素相關(guān)受體、HER2、乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及相關(guān)化學(xué)治療耐藥等密切相關(guān)。本研究旨在研究mi R-429對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。通過過表達(dá)mi R-429探究了mi R-429對(duì)人乳腺癌Bcap37細(xì)胞功能的影響。與之前的大多數(shù)研究基本一致,我們發(fā)現(xiàn)mi R-429上調(diào)后能顯著促進(jìn)人乳腺癌Bcap37細(xì)胞的增殖;同時(shí)與對(duì)照的細(xì)胞相比,無(wú)論是劃痕實(shí)驗(yàn)還是transwell實(shí)驗(yàn),過表達(dá)mi R-429的Bcap37細(xì)胞具有更強(qiáng)的遷移能力。在此證明mi R-429促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖及遷移,從而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王瀚;人結(jié)直腸癌多肽探針的實(shí)驗(yàn)研究[D];陜西師范大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1207981