本文關鍵詞：雄激素受體與相關分子在乳腺癌中作用的研究

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【摘要】：目的在不同雌激素受體(estrogen receptor,ER)狀態(tài)乳腺癌中分別探討雄激素受體(androgen receptor,AR)、轉(zhuǎn)移相關蛋白1(metastasis-associated protein-1,MTA1)與人類表皮生長因子受體2(HER2)三者之間的表達關系,其表達與臨床病理特征的聯(lián)系和對預后產(chǎn)生的影響。在ER陰性乳腺癌細胞系中探究AR活性的變化對其下游分子表達的作用,及對ER陰性的MDA-MB-231乳腺癌細胞增殖的影響。方法收集天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院2008年1月至2009年12月經(jīng)手術切除、病理證實的乳腺浸潤性導管癌,分別在ER陽性和陰性病例中各隨機抽取120例,共計240例。采用免疫組化方法檢測AR、MTA1表達,ER、HER2、相關臨床病理特征及隨訪資料通過查閱存檔的臨床病歷資料獲得。本研究采用雌激素受體陰性的乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞體外培養(yǎng),利用免疫熒光驗證AR在該細胞系中的表達狀態(tài)。通過向MDA-MB-231細胞中感染慢病毒得到AR低表達的細胞。隨后MTT和平板克隆實驗來驗證AR下調(diào)組與對照組的細胞增殖能力,并且通過實時定量PCR(real time PCR,RT-PCR)驗證mi R-let-7a的表達是否隨AR的下調(diào)出現(xiàn)相應的變化。應用Western blot的方法檢測AR下調(diào)之后相應的下游蛋白表達的變化。向AR下調(diào)的細胞中感染let-7a上調(diào)的慢病毒,進而用MTT和平板克隆實驗來驗證let-7a上調(diào)組與對照組的細胞增殖能力,并且通過實時定量PCR驗證mi R-let-7a的表達是否出現(xiàn)相應的變化。應用Western blot的方法檢測let-7a上調(diào)之后相應的下游蛋白表達的變化,從而驗證let-7a在AR對乳腺癌細胞生長增殖能力影響中的作用。本研究初步探討AR與let7a之間的作用關系及其對下游分子表達和細胞增殖能力的影響。結(jié)果在240例患者中,AR陽性者占59.2%,MTA1過表達者占36.7%。MTA1的表達在ER陰性組中與AR/HER2共表達顯著相關。在中位隨訪時間為74個月的時間里,單因素生存分析顯示,ER陽性組中AR陽性者具有較好的預后(P0.05),MTA1的表達則與患者的預后無關;ER陰性組中AR與HER2共表達的病例預后要差于其他病例(P0.05),MTA1過表達也預示著不良的預后(P0.05)。Cox多因素分析結(jié)果顯示AR表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是影響ER+組的無瘤生存率的獨立因素;而在ER-組中,AR/HER2共表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響無瘤生存率的獨立因素。1.免疫熒光結(jié)果顯示AR在MDA-MB-231細胞中廣泛表達2.以慢病毒為載體感染MDA-MB-231細胞,并篩選擴增得到AR下調(diào)細胞和對照組細胞。利用穩(wěn)定感染的細胞,MTT實驗發(fā)現(xiàn)AR下調(diào)組的細胞增殖能力要明顯強于對照組;平板克隆實驗的結(jié)果也與MTT實驗相同,AR下調(diào)組的細胞克隆數(shù)要多于對照組的細胞數(shù)。3.RT-PCR驗證AR下調(diào)組與對照組間let-7a的表達差異,結(jié)果顯示AR下調(diào)組的細胞中l(wèi)et-7a相對于對照組有0.3倍的下調(diào)。Western Blot實驗結(jié)果顯示AR下調(diào)組的AR相對于對照組有明顯下調(diào),而且let-7a下游分子HMGA2和磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p STAT3)的表達在AR下調(diào)組中有顯著的上調(diào)。4.以慢病毒為載體感染AR下調(diào)細胞,并篩選擴增得到AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的MDA-MB-231細胞。利用該細胞進行MTT實驗與平板克隆實驗,結(jié)果顯示AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的細胞系相比于AR下調(diào)的對照細胞細胞增殖能力明顯被抑制,平板克隆實驗也有相同趨勢的結(jié)果。5.RT-PCR驗證AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的細胞與AR下調(diào)的對照細胞之間let-7a的表達差異,結(jié)果顯示let-7a相對于對照組有約9倍的上調(diào)。而且實驗組中l(wèi)et-7a下游分子HMGA2和p STAT3的表達相對于對照組有顯著下調(diào)。結(jié)論ER陽性組中AR是影響患者預后的獨立因素,而在ER陰性組中MTA1的表達與AR/HER2共表達顯著相關。我們的結(jié)果表明AR在ER陽性的乳腺癌中可能成為內(nèi)分泌治療的新靶標,在ER陰性乳腺癌中AR/HER2的相互作用有可能通過MTA1分子調(diào)節(jié)腫瘤細胞的惡性行為。雄激素是通過與其相應的受體來發(fā)揮生物學作用的。研究顯示AR信號的抑制使得細胞增殖能力增強,同時細胞內(nèi)HMGA2和p STAT3蛋白上調(diào)。AR下調(diào)之后let-7a的表達同時出現(xiàn)下調(diào),同時可以使let-7a下游的蛋白表達產(chǎn)生相應變化。且當let-7a上調(diào)之后原本AR下調(diào)的細胞增殖能力下降,同時let-7a下游的蛋白表達出現(xiàn)抑制,提示AR可能通過let-7a作用于其下游分子。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
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本文編號：1207577