本文關(guān)鍵詞：ω-3多不飽和脂肪酸對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的已有報(bào)道ω-3多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)能夠抑制腫瘤的發(fā)生和腫瘤細(xì)胞的增殖,但作用機(jī)制尚未完全清楚。YAP作為Hippo通路中的核心蛋白,在腫瘤的發(fā)生及增殖中起重要作用。本研究擬觀察ω-3 PUFAs DHA和EPA對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的作用;探討相應(yīng)的作用機(jī)理;揭示ω-3 PUFAs DHA和EPA作用于結(jié)腸癌細(xì)胞的信號(hào)通路,為預(yù)防結(jié)腸癌的發(fā)生和輔助治療提供理論依據(jù)和候選藥物。方法1.通過MTT法觀察DHA和EPA對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和LOVO增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)觀察DHA和EPA對(duì)HT-29和LOVO細(xì)胞凋亡的影響。2.DHA和EPA處理HT-29和LOVO細(xì)胞,通過Western Blot檢測(cè)上述細(xì)胞中YAP及其磷酸化YAP(p-YAP)的水平;并對(duì)比不同濃度梯度DHA和EPA的作用結(jié)果,確定最適作用濃度。3.DHA和EPA處理HT-29和LOVO細(xì)胞,激光共聚焦顯微技術(shù)(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)觀察細(xì)胞中YAP的核漿定位。4.采用RNA干擾技術(shù)沉默YAP的表達(dá),DHA和EPA處理干擾YAP后的HT-29和LOVO細(xì)胞,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)上述細(xì)胞中YAP靶基因mRNA的變化。5.DHA和EPA處理HT-29和LOVO細(xì)胞后,通過Western Blot檢測(cè)上述細(xì)胞中LATS及其磷酸化LATS(p-LATS)的變化。6.分別干擾Hippo通路中LATS及MST,DHA和EPA處理干擾后HT-29和LOVO細(xì)胞,通過Western Blot檢測(cè)上述細(xì)胞中YAP及p-YAP的變化。7.通過免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)人結(jié)腸癌組織與正常腸組織中G蛋白偶聯(lián)受體(G Protein-Coupled Receptors,GPCRs)GPCR40和GPCR120是否存在。8.分別干擾GPCR40和GPCR120,DHA和EPA處理干擾后HT-29和LOVO細(xì)胞,通過Western Blot檢測(cè)上述細(xì)胞中LATS及p-LATS。9.在HT-29和LOVO細(xì)胞中過表達(dá)突變型的Gs蛋白后,DHA和EPA處理上述細(xì)胞,通過Western Blot檢測(cè)上述細(xì)胞中p-YAP和p-LATS。10.用pka的抑制劑h89處理ht-29和lovo細(xì)胞,dha和epa處理上述細(xì)胞,通過westernblot檢測(cè)上述細(xì)胞p-yap和p-lats。結(jié)果1.mtt實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明dha和epa對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖有抑制作用,并且有時(shí)間和濃度依賴性。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明dha和epa促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡。3.westernblot結(jié)果表明dha和epa促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞p-yap增加,且有時(shí)間和濃度依賴性。4.激光共聚焦試驗(yàn)結(jié)果顯示:dha和epa能促進(jìn)yap的核漿轉(zhuǎn)移。5.實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示:dha和epa處理結(jié)腸癌細(xì)胞后,yap的靶基因(促增殖基因及抗凋亡基因)在mrna水平上明顯下降;dha和epa處理沉默yap后的結(jié)腸癌細(xì)胞,yap的靶基因(促增殖基因及抗凋亡基因)在mrna水平上不再變化,說明dha和epa降低這些基因mrna水平是通過yap起作用的。6.westernblot結(jié)果顯示dha和epa使p-lats增加,且有時(shí)間和濃度依賴性。7.westernblot結(jié)果顯示:分別干擾lats和mst后,p-yap水平下降,再用dha和epa處理細(xì)胞后不能使p-yap增加。8.免疫組織化學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示gpcr40和gpcr120在人結(jié)腸癌中表達(dá)。9.westernblot結(jié)果顯示:分別干擾gpcr40和gpcr120后,再用dha和epa處理細(xì)胞后不能使p-yap和p-lats增加。10.在ht-29和lovo細(xì)胞中過表達(dá)突變型gs后,發(fā)現(xiàn)p-yap和p-lats下降,再用dha和epa處理細(xì)胞后不能使p-yap和p-lats增加。11.h89處理ht-29和lovo細(xì)胞,結(jié)果顯示p-yap和p-lats下降,再用dha和epa處理細(xì)胞后不能使p-yap和p-lats增加。結(jié)論1.dha和epa對(duì)ht-29和lovo細(xì)胞有抑制其增殖并促進(jìn)其凋亡的作用,且有時(shí)間和濃度依賴性。2.dha和epa能促進(jìn)ht-29和lovo細(xì)胞中yap的磷酸化,且使蛋白yap的核內(nèi)定位減少。3.dha和epa使蛋白yap的靶基因包括促增殖及抑凋亡基因的轉(zhuǎn)錄減少。4.DHA和EPA通過Hippo通路促進(jìn)LATS的磷酸化。5.DHA和EPA通過與GPCR40和GPCR120結(jié)合,促進(jìn)YAP和LATS的磷酸化。6.DHA和EPA通過Gs下游蛋白激酶PKA,與Hippo通路關(guān)聯(lián),抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35

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2 王春暉;歐陽欽;唐承薇;黃明慧;李獻(xiàn);;選擇性及非選擇性COX-2抑制劑對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

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5 沈丹;鄧長生;;過氧化物酶體增殖物激活受體γ在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其激動(dòng)劑對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的生長抑制作用[J];臨床內(nèi)科雜志;2008年01期

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7 高喜廉，，傅志民，姜宗源;結(jié)腸癌細(xì)胞腸壁縱向浸潤與臨床意義[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年03期

8 鄭平菊,黃威權(quán),王瑞安,孫嵐,高平;5-羥色胺及其受體在結(jié)腸癌細(xì)胞的免疫組織化學(xué)定位[J];科學(xué)通報(bào);1995年21期

9 林潔;黃瓊;來茂德;;5-氮-2′-脫氧胞苷對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2008年04期

10 王德力;齊東麗;;光鑷?yán)庾V技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞的研究[J];長春大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

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1 許峰;王杉;葉穎江;崔志榮;;腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞在結(jié)腸癌細(xì)胞殺傷中的作用及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

2 王貴玉;王錫山;;激光捕獲微切割技術(shù)分離結(jié)腸癌細(xì)胞用于蛋白組學(xué)研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2005年

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