發(fā)布時(shí)間：2017-11-20 03:01

  本文關(guān)鍵詞：丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖影響的研究

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【摘要】：目的:近年來(lái),乳腺癌已經(jīng)成為威脅女性生命與健康的頭號(hào)“公敵”。雖然經(jīng)過(guò)系統(tǒng)、正規(guī)的綜合治療使乳腺癌的生存率大大提高,但仍有一些特殊類型如三陰性乳腺癌生存獲益不太顯著。我們把ER、PR和HER-2均為陰性的乳腺癌定義為三陰性乳腺癌。由于缺乏有效的靶向藥物,治療三陰性乳腺癌的方法很少,復(fù)發(fā)率較高[1]。雌孕激素及其受體在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展甚至是治療方面都起著至關(guān)重要的作用�？勾萍に匾恢笔侵饕膬�(nèi)分泌治療方向。而關(guān)于雄激素及雄激素受體在乳腺癌治療方面的研究卻鮮有報(bào)導(dǎo)。雄激素是前列腺癌發(fā)生發(fā)展的主要原因,研究發(fā)現(xiàn)二氫睪酮與睪酮會(huì)和雄激素受體結(jié)合進(jìn)而引起基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞增殖,從而導(dǎo)致前列腺癌的發(fā)生[2]。因此抗雄激素受體成為了治療前列腺癌的主要方向。不僅如此,很早以前就進(jìn)行過(guò)關(guān)于雄激素對(duì)乳腺癌作用的研究。1958年就有報(bào)道每周肌內(nèi)注射150-300mg的丙酸睪丸酮作為臨床治療乳腺癌的方法之一[3]。在二氫睪酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株ZR-75-1作用的研究中也發(fā)現(xiàn)了雄激素抑制管腔型乳腺癌細(xì)胞的增殖[4]。然而關(guān)于雄激素對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞株作用的研究卻還在探索階段。本研究旨在觀察不同濃度的丙酸睪丸酮對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用不同時(shí)間后的增殖和抑制情況,以及相關(guān)蛋白表達(dá)含量的變化。分析丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株M D A-M B-2 3 1增殖的作用,并探索其可能的發(fā)生機(jī)制。方法:培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231,用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察細(xì)胞的ER、PR、AR、HER-2表達(dá)情況。將培養(yǎng)好的乳腺癌細(xì)胞株接種到96孔板中,分為若干實(shí)驗(yàn)組,并設(shè)一對(duì)照組。將濃度為10-4mmol/L至10-12mmol/L的丙酸睪丸酮分別加入不同實(shí)驗(yàn)組中,培養(yǎng)24-72小時(shí)后運(yùn)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞抑制率。從中選取四個(gè)作用明顯的濃度。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)四個(gè)濃度作用下細(xì)胞的Cyclin D1、m TOR和PTEN表達(dá)情況,進(jìn)一步探索丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞蛋白水平的作用機(jī)制。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果:1通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法制成的載玻片在倒置顯微鏡下觀察,乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中ER、PR、HER-2均為陰性表達(dá);AR則為陽(yáng)性表達(dá)。2不同濃度丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用不同時(shí)間后的影響。2.1通過(guò)MTT法檢測(cè)同一時(shí)間內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的影響:濃度為10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L的丙酸睪丸酮在24小時(shí)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞表現(xiàn)為促進(jìn)增殖作用,其增殖率分別為1.86%±1.13%、4.70%±0.59%、7.14%±0.07%、9.26%±1.10%,且濃度越高,增殖作用越弱;在48小時(shí)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞表現(xiàn)為抑制增殖作用,其抑制率分別為9.73%±2.04%、4.47%±1.17%、1.92%±0.23%、0.35%±0.16%,且濃度越高,抑制作用越明顯;在72小時(shí)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞也表現(xiàn)為抑制增殖作用,其抑制率分別為17.69%±0.74%、15.41%±0.10%、6.38%±0.23%、1.57%±0.78%,且濃度越高,抑制作用越明顯。統(tǒng)計(jì)分析后顯示同一時(shí)間內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖率及抑制率均有差異。各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2通過(guò)MTT法檢測(cè)同一濃度的丙酸睪丸酮作用不同時(shí)間后對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的影響:濃度為10-5mmol/L的丙酸睪丸酮對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞作用24h、48h、72h后的抑制率分別為-1.86%±1.13%、9.73%±2.04%、17.69%±0.74%。10-7mmol/L的抑制率分別為-4.70%±0.59%、4.47%±1.17%、15.41%±0.10%。10-9mmol/L的抑制率分別為-7.14%±0.07%、1.92%±0.23%、6.38%±0.23%。10-11mmol/L的抑制率分別為-9.26%±1.10%、0.35%±0.16%、1.57%±0.78%。且作用時(shí)間越長(zhǎng),抑制作用越明顯。統(tǒng)計(jì)分析后顯示同一濃度丙酸睪丸酮作用不同時(shí)間后對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖率及抑制率均有差異。且各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3不同濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)丙酸睪丸酮作用不同時(shí)間后的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中Cyclin D1、m TOR及PTEN蛋白的表達(dá)情況。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到:Cyclin D1蛋白在乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231對(duì)照組培養(yǎng)24h、48h及72h后的表達(dá)率分別為99.82%±0.02%、99.90%±0.04%、99.91%±0.04%;m TOR蛋白的表達(dá)率分別為99.63%±0.03%、99.97%±0.02%、99.77%±0.06%;PTEN蛋白的表達(dá)率分別為98.90%±0.06%、98.30%±0.31%、97.35%±0.35%。四種濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮作用24h后Cyclin D1蛋白與m TOR蛋白的表達(dá)率為99.86%±0.04%、99.90%±0.06%、99.92%±0.05%、99.96%±0.03%;99.78%±0.10%、99.82%±0.11%、99.88%±0.08%、99.92%±0.09%。作用48h后Cyclin D1蛋白與m TOR蛋白的表達(dá)率為99.67%±0.06%、99.74%±0.10%、99.81%±0.11%、99.85%±0.10%;99.68%±0.16%、99.72%±0.15%、99.82%±0.13%、99.93%±0.03%。作用72h后Cyclin D1蛋白與m TOR蛋白的表達(dá)率為99.42%±0.18%、99.66%±0.16%、99.76%±0.12%、99.82%±0.15%;99.41%±0.11%、99.49%±0.15%、99.60%±0.10%、99.65%±0.13%。四種濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮作用24h后PTEN蛋白的表達(dá)率為98.80%±0.17%、98.76%±0.18%、98.61%±0.33%、96.18%±0.20%。作用48h后PTEN蛋白的表達(dá)率為99.59%±0.20%、99.46%±0.19%、99.42%±0.18%、98.86%±0.13%。作用72h后PTEN蛋白的表達(dá)率為99.76%±0.11%、99.51%±0.14%、98.93%±0.17%、98.46%±0.18%。統(tǒng)計(jì)分析后顯示在三個(gè)不同時(shí)間組內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮作用于乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231后Cyclin D1、m TOR及PTEN蛋白的表達(dá)均有差異,蛋白組內(nèi)各濃度之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的ER、PR及HER2的表達(dá)均為陰性,AR的表達(dá)為陽(yáng)性。2不同濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用24小時(shí)后有促進(jìn)增殖的作用,且濃度越高,增殖作用越弱。而同樣濃度等級(jí)的丙酸睪丸酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用48、72小時(shí)后則表現(xiàn)為抑制作用,且濃度越高,抑制作用越明顯。不僅如此,同一濃度下丙酸睪丸酮作用時(shí)間越長(zhǎng),對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的抑制作用越明顯。3丙酸睪丸酮在作用乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231 24h時(shí)細(xì)胞內(nèi)的Cyclin D1蛋白及m TOR蛋白表達(dá)上調(diào);PTEN蛋白表達(dá)下降。作用48h及72h時(shí)細(xì)胞內(nèi)的PTEN蛋白表達(dá)上調(diào);Cyclin D1蛋白及m TOR蛋白表達(dá)下降。因此丙酸睪丸酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)增殖蛋白Cyclin D1、m TOR及凋亡蛋白PTEN對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231產(chǎn)生作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：1205805