發(fā)布時(shí)間：2017-11-19 23:28

  本文關(guān)鍵詞：4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞株增殖凋亡的影響及其可能機(jī)制

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【摘要】：研究背景:肺癌是嚴(yán)重危害人類生命健康的惡性腫瘤之一,發(fā)病率及死亡率均居所有癌癥之首。近年來,雖然肺癌診斷及治療方式不斷進(jìn)步,但肺癌患者發(fā)病率死亡率不斷上升,因此探索新型高效抗腫瘤藥物勢(shì)在必行。目的:探討全反式維甲酸(ATRA)新型衍生物4-氨基-2-三氟-甲基苯基維甲酸酯(ATPR)在體外對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能機(jī)制的研究。方法:以A549細(xì)胞為研究對(duì)象,經(jīng)ATPR及ATRA處理A549細(xì)胞48 h,MTT及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)細(xì)胞的增殖及單細(xì)胞克隆形成能力的影響;Western blot檢測(cè)ATPR對(duì)增殖相關(guān)蛋白ASPP家族(P53凋亡刺激蛋白家族)、WP53(野生型P53)及其下游P21、MDM2蛋白和凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、Bax、pro-caspase3、NF-κB(P65)蛋白的表達(dá)水平的影響。Hoechst染色用來觀察觀察ATPR對(duì)A549細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果:MTT實(shí)驗(yàn)中,不同濃度的ATPR及ATRA(10、20、25、40、50、75、100μmol/L)處理96孔板中A549細(xì)胞48 h,經(jīng)MTT孵育4 h后測(cè)定各組吸光度,并換算成各組細(xì)胞存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ATRA處理后各濃度組之間細(xì)胞存活率無明顯差異;而經(jīng)ATPR處理后,從50μmol/L開始到100μmol/L濃度組,隨著ATPR濃度升高,細(xì)胞存活率逐漸降低。說明ATPR的濃度調(diào)至50μmol/L時(shí),對(duì)A549細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用。因此,50μmol/L被選為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的主要藥物處理濃度。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)中,ATPR及ATRA處理后的單個(gè)細(xì)胞接種于6孔板孵育8-10天后,結(jié)晶紫染色處理。再用肉眼及倒置顯微鏡下觀察,與對(duì)照組相比,ATPR及ATRA組克隆數(shù)目及單個(gè)克隆細(xì)胞數(shù)量減少。且相同濃度下,ATPR組克隆數(shù)目及單個(gè)克隆細(xì)胞數(shù)量均較ATRA組減少。經(jīng)ATPR及ATRA處理細(xì)胞48 h后,用Western blot檢測(cè)ASPP家族、WP53及下游P21、MDM2蛋白表達(dá)水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,與對(duì)照組相比,ATPR及ATRA處理后i ASPP、P21灰度值均有不同程度下降,WP53、MDM2灰度值均有不同程度上升(P0.05)。而ASPP1及ASPP2經(jīng)藥物處理后灰度值變化與其對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即ATPR下調(diào)i ASPP、P21的表達(dá),上調(diào)WP53、MDM2的表達(dá),而對(duì)ASPP1、ASPP2表達(dá)無影響。通過Hoechst染色觀察經(jīng)ATPR及ATRA處理48 h后的A549細(xì)胞凋亡情況。倒置熒光顯微鏡視野下,與對(duì)照組相比,ATPR及ATRA組細(xì)胞數(shù)量較少,細(xì)胞核染色質(zhì)凝集,且出現(xiàn)凋亡小體。且在相同濃度下,ATPR組凋亡小體數(shù)量比ATRA組增多。通過Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、Bax、pro-caspase3、NF-κB(P65)表達(dá)水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,與對(duì)照組相比,A549細(xì)胞經(jīng)ATPR及ATRA處理后BCL-2、pro-caspase3、NF-κB(P65)灰度值均有不同程度下降,Bax灰度值均有不同程度上升(P0.05)。即ATPR下調(diào)BCL-2、pro-caspase3、NF-κB(P65)的表達(dá),上調(diào)Bax的表達(dá)。結(jié)論:ATPR可以抑制A549細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡,ATPR抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制可能與下調(diào)i ASPP表達(dá)從而促進(jìn)WP53調(diào)控的BCL-2/Bax比率下降啟動(dòng)細(xì)胞凋亡相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1205320