本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體2對人肝細胞癌生物學(xué)行為的作用

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【摘要】：研究背景肝細胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,具有較高的發(fā)病率及死亡率。到目前為止,肝細胞癌的發(fā)病機制并不完全明確,且缺乏有效的治療方法,所以研究肝細胞癌的發(fā)病機制,尋找新的、有效的治療靶點、治療方法仍是迫切需要解決的問題。Toll樣受體2(toll-like receptor2,TLR2)是介導(dǎo)非特異性免疫反應(yīng)的重要固有免疫受體,其信號途徑亦被認為是慢性炎癥發(fā)生的一種機制,但是其也可以介導(dǎo)腫瘤細胞免疫逃避以及腫瘤發(fā)展。然而,TLR2在人肝細胞癌的發(fā)展的作用尚需進一步研究。目的研究TLR2對人肝細胞癌細胞系HepG2、BEL-7402細胞生物學(xué)行為的作用及其作用機制。方法1培養(yǎng)兩種人肝癌細胞系：HepG2、BEL-7402,用Western blot方法檢測兩種細胞系TLR2蛋白表達水平；2 siRNA轉(zhuǎn)染：合成3條針對TLR2的特異性小干擾RNA(TLR2-siRNA1、 TLR2-siRNA2、TLR2-siRNA3)。用TLR2-siRNAs轉(zhuǎn)染HepG2、BEL-7402細胞。用Real time PCR、Western blot方法分別在mRNA和蛋白水平檢測TLR2-siRNA的干擾效率,并篩選干擾效率最高的一條小干擾RNA用于后續(xù)實驗處理,實驗分組：空白組、陰性對照組、TLR2-siRNA組；3重組高遷移率族蛋白1(recombinant high mobility group box1, rHMGB1)處理：用rHMGB1處理轉(zhuǎn)染后的細胞。實驗分組：空白組、rHMGB1處理組、陰性對照+rHMGB1處理組、TLR2-siRNA+rHMGB1處理組：4細胞生物學(xué)行為檢測：MTT法檢測HepG2、BEL-7402人肝癌細胞的增殖能力；Transwell實驗檢測兩種肝癌細胞的遷移、侵襲能力；流式細胞術(shù)檢測細胞的凋亡；5 Western blot檢測NF-KB/P65的表達。結(jié)果1 Western blot結(jié)果顯示：TLR2在HepG2、BEL-7402兩種人肝癌細胞系中均表達；2 TLR2-siRNA明顯的抑制TLR2的表達；Western blot和Real Time PCR檢測顯示：TLR2-siRNAs組的蛋白及mRNA表達水平均較空白組及陰性對照組明顯下降(P0.001),而以TLR2-siRNA2的干擾效率最高。3 rHMGB1促進肝癌細胞增殖、遷移、侵襲,抑制凋亡；而TLR2-siRNA抑制細胞增殖、遷移、侵襲,促進凋亡,并可減弱rHMGB1的作用；MTT結(jié)果示：TLR2-siRNA組的細胞增殖能力較陰性對照組、空白組明顯下降(P0.001),而rHMGB1組細胞生長能力較rHMGB1+TLR2-siRNA組、空白組明顯增高(P0.001); Transwell實驗顯示：TLR2-siRNA組的細胞遷移、侵襲能力較陰性對照組、空白組明顯下降(P0.01),而rHMGB1組細胞遷移、侵襲能力較rHMGB1+TLR2-siRN A組、空白組明顯增高(P0.001)；流式細胞術(shù)結(jié)果示：TLR2-siRNA組的細胞凋亡較陰性對照組、空白組明顯升高(P0.001),而rHMGB1組細胞凋亡能力較rHMGB1+TLR2-siRNA組、空白組明顯下降。4 rHMGB1提高NF-κB/P65的表達；而TLR2-siRNA降低NF-κB/P65表達,并減弱rHMGB1對NF-κB/P65表達的促進作用；Western blot檢測示：TLR2-siRNA組的細胞NF-κB/P65的表達水平較陰性對照組、空白組明顯下降(P0.001),而rHMGB1組細胞NF-κB/P65的表達水平較rHMGB1+TLR2-siRNA組、空白組明顯增高(P0.01)。結(jié)論1 TLR2、高遷移率族蛋白1 (high mobility group boxl, HMGB1)可以促進肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲而抑制其凋亡。下調(diào)TLR2的表達能明顯減弱HMGB1的作用,TLR2可能是HMGB1發(fā)生促癌作用的下游信號分子之一。2研究提示：NF-κB/P65為HMGB1、TLR2促進肝癌發(fā)展的下游作用信號分子。3 TLR2有望成為肝細胞癌的新的治療靶點。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王文舉;李鴻鈞;孫茂盛;;NF-κB與持久炎癥及腫瘤發(fā)生關(guān)系[J];生命的化學(xué);2007年03期

2 劉印;田京;;肝細胞癌相關(guān)信號通路及靶向治療研究進展[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2013年06期

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本文編號：1203527