本文關鍵詞：三氧化二砷、紫杉醇及聯(lián)合對人骨髓瘤細胞RPMI8226的作用

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【摘要】：目的:多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma MM)以骨痛、溶骨性病變、病理性骨折和貧血為臨床特征,是一種漿細胞惡性克隆性增生性疾病,盡管目前多發(fā)性骨髓瘤治療方法多種多樣,包括化療、免疫治療及自體造血干細胞移植(autologousstem cell transpantation ASCT)等,但是至今仍不能徹底治愈,絕大多數(shù)患者都會因為復發(fā)、耐藥等導致死亡,患者的中位生存期一般為3-5年。目前,通過臨床治療控制疾病進展、改善患者生活質量,延長無病生存期是多發(fā)性骨髓瘤患者最理想狀態(tài),臨床上對初診的多發(fā)性骨髓瘤患者的治療普遍采用如M2、MP(美法侖+潑尼松)、VAD(長春新堿+阿霉素+地塞米松)等方案,但這幾種方案都沒有徹底治愈患者。近年來,隨著各種改良方案的不斷出現(xiàn),MM的聯(lián)合化療有了新的進展,通過對多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病機制及耐藥機制等多方面的深入研究,新型藥物免疫抑制劑、蛋白酶體抑制劑等及單克隆抗體治療MM已經(jīng)在臨床上取得了較大成效,使治療的有效率、臨床緩解率、無病生存率均有明顯提高。但是所有患者會復發(fā)、耐藥仍是一大難題,需支付巨額醫(yī)療費用也是很多患者及家庭放棄最好治療的一方面原因,因此新型藥物的不斷開發(fā)固然勢在必行,而聯(lián)合化療方案的探求也值得關注。三氧化二砷(ATO)不僅在體外對多種實體瘤和血液腫瘤細胞有明顯抑制增殖和誘導凋亡的作用,在臨床上亦是得到廣泛應用,其抗腫瘤作用得以充分發(fā)揮,尤其對惡性血液系統(tǒng)疾病的治療貢獻極大,有學者對ATO作用于人骨髓瘤細胞的機制進行了研究,其結果表明:ATO對RPMI8226細胞的抑制增殖及誘導凋亡作用顯著;ATO將RPMI8226細胞阻滯在G1期;ATO作用后,對ERK1/2及其磷酸化蛋白表達無明顯影響,使細胞的VEGF表達及分泌量減少,Bcl-2蛋白表達下降。三氧化二砷能通過多重作用機制達到抗腫瘤的目的,如誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞分化、抑制端粒酶活性等,因此也成為聯(lián)合化療用藥的選擇之一。紫杉醇也是臨床常用化療藥物,其主要抗腫瘤作用機制為抑制有絲分裂過程,使細胞周期停滯在G2/M期,從而達到抑制腫瘤細胞增殖作用。該藥在肺癌、食管癌、卵巢癌等實體瘤中得到廣泛應用,其不良反應主要包括過敏反應、骨髓抑制、心臟毒性、神經(jīng)毒性反應、癲癇發(fā)作等,嚴重者臨床表現(xiàn)可危及生命,已引起了臨床工作者重視,因此安全而有效的利用紫杉醇抗腫瘤也是學者們不斷追求的目標。應用紫杉醇對血液系統(tǒng)惡性腫瘤細胞和臨床試驗的研究均有明確的結論,證實其在惡性血液系統(tǒng)疾病中也具有明顯的誘導凋亡的作用。方法:不同濃度的三氧化二砷、紫杉醇及二者聯(lián)合處理人骨髓瘤細胞RPMI8226細胞株,實驗通過不同濃度的單藥紫杉醇(藥物濃度為0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5μmol/L)作用于RPMI8226細胞,本實驗分為實驗組和對照組(A組),實驗組分為三氧化二砷單藥組(藥物濃度為1、2、4μmol/L)為B、C、D組,紫杉醇單藥組(藥物濃度為0.01μmol/L)為E組,二者聯(lián)合用藥組(藥物濃度為ATO 1μmol/L+PTX0.01μmol/L、2μmol/L+PTX0.01μmol/L、4mol/L+PTX0.01μmol/L)為F、G、H組,運用倒置相差顯微鏡來觀察細胞凋亡及形態(tài)學變化;在不同的時間(24h、48h、72h)通過MTT比色法檢測RPMI8226細胞增殖抑制率和細胞生長率;應用流式細胞術檢測對照組和實驗組對細胞周期的影響;采用Western blot檢測對細胞周期相關蛋白cdc2、Cyclin D1的影響。結果:1 RPMI8226細胞形態(tài)的觀察倒置相差顯微鏡:實驗中隨著紫杉醇作用時間的延長,多數(shù)RPMI8226細胞出現(xiàn)明顯變形,成桿狀或梭形,細胞折光性逐漸變差,最后細胞膜變的不完整,形成較多細胞碎片。實驗中三氧化二砷單藥組作用過的RPMI8226細胞隨濃度增加、作用時間延長,出現(xiàn)細胞皺縮變小,核固縮,呈均勻的致密物,細胞膜不規(guī)則突起,細胞折光性差,直至細胞膜不完整,形成細胞碎片。聯(lián)合用藥組比相同濃度的單藥組凋亡及壞死細胞增多,細胞形態(tài)的改變與紫杉醇單藥組相似。2 MTT比色法測定RPMI8226細胞增殖抑制率2.1三氧化二砷組:相同作用時間下,隨著ATO藥物濃度的增加,對細胞增殖抑制率呈劑量依賴性增加;相同濃度的ATO隨作用時間延長,對RPMI8226細胞增殖抑制率增加,呈時間依賴性。其中,相同作用時間組中,各濃度之間均存在差異,有統(tǒng)計學意義(P0.05),相同。2.2紫杉醇組:實驗中,相同作用時間,PTX濃度在0.01μmol/L-1μmol/L之間,細胞增殖抑制率恒定,無明顯劑量依賴,濃度在1μmol/L-3.5μmol/L之間,細胞增殖抑制率隨濃度的增加而升高;同一濃度的PTX,隨作用時間的延長,細胞增殖抑制率升高。濃度為0.01μmol/L的紫杉醇24h、48h、72h的抑制率分別為20.09±9.11%、39.77±1.85%、54.39±3.75%。2.3聯(lián)合用藥組:不同濃度的ATO與同一濃度的PTX肽聯(lián)合,隨ATO濃度增加,細胞生長率下降;以4μmol/L的ATO聯(lián)合0.01μmol/L的PTX作用于RPMI8226細胞48小時為例,其增殖抑制率為47.95±7.32%,而4μmol/L的ATO單獨作用于RPMI8226細胞48小時的增殖抑制率為32.98±6.07%,PTX0.01μmol/L單獨作用于RPMI8226細胞48小時的增殖抑制率為39.77±1.85%(P0.05),有統(tǒng)計學意義。二者聯(lián)合對RPMI8226細胞的增殖抑制作用明顯,具有濃度、時間依賴性。3流式細胞術檢測細胞周期(PI染色):單藥及聯(lián)合用藥處理RPMI8226細胞,隨著藥物濃度的增加,存活細胞量明顯減少,凋亡細胞數(shù)量增加。細胞周期檢測結果顯示對照組處于G0/G1期、S期細胞分別是27.45%、68.50%,而H組處于G2期、S期細胞分別是89.37%、8.48%,實驗組和對照組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4 Western blot檢測結果顯示對照組和實驗組之間cdc2蛋白表達量有統(tǒng)計學意義(P0.05),與對照組比較,實驗組Cyclin D1蛋白表達下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1三氧化二砷與紫杉醇均可誘導人骨髓瘤RPMI8226細胞凋亡,抑制該細胞的增殖。2兩者聯(lián)合作用能顯著提高RPMI8226細胞的凋亡率,增強抑制其生長的作用。3三氧化二砷、紫杉醇及二者聯(lián)合使人骨髓瘤細胞RPMI8226發(fā)生細胞周期阻滯,其可能是抑制惡性腫瘤細胞增殖的有效途徑之一。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.3

【參考文獻】

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1 劉道華;賴t熝，

本文編號：1197395