本文關鍵詞：CCNG2對甲狀腺癌細胞裸鼠移植瘤抑制的實驗研究

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【摘要】：目的甲狀腺癌(Thyroid carcinoma,TC)是一種比較常見的惡性腫瘤,發(fā)病率在過去幾十年中不斷增加,占全身惡性腫物的1%~5%,為頭頸部第一常見惡性腫瘤。盡管通過手術和放射性碘標準治療后,能夠擁有良好的預后及長期生存率。但復發(fā)或放射性碘難治性疾病患者僅有15%~20%的10年生存率。因此針對甲狀腺癌的分子靶向治療成為醫(yī)療領域迫切需要解決的問題。CCNG2作為周期蛋白家族一員,是細胞周期調(diào)控的負性因子,參與調(diào)控和腫瘤進展相關的多種功能。CCNG2基因表達異�？梢詫е轮行捏w的異常擴增引起細胞周期紊亂從而誘導腫瘤發(fā)生。我們在前期體外實驗研究中發(fā)現(xiàn)在甲狀腺乳頭狀癌組織中CCNG2表達明顯降低,通過構建過表達CCNG2基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染甲狀腺癌K1細胞,我們發(fā)現(xiàn)K1細胞出現(xiàn)明顯的增殖抑制和凋亡增加。為了進一步研究CCNG2過表達后的體內(nèi)腫瘤抑制效應,采用裸鼠異種移植瘤模型,構建CCNG2過表達慢病毒載體,應用慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術使CCNG2穩(wěn)定長期表達于K1細胞,對CCNG2在甲狀腺癌的抑制作用進行初步的體內(nèi)實驗研究。方法將18只4周齡SPF級BALB/C雌性裸鼠編號,隨機數(shù)字表法分為空白對照組(K1細胞組)、陰性轉(zhuǎn)染對照組(LV-GFP-Puro細胞組)和CCNG2轉(zhuǎn)染組(LV-CCNG2細胞)3組,每組6只。分別收集生長狀態(tài)良好的3種細胞(K1細胞、LV-CCNG2細胞、LV-GFP-Puro細胞)消化后重懸于無血清培養(yǎng)基中(終濃度為5×107)于裸鼠右側腋窩皮下按組別接種建立甲狀腺癌異種移植瘤模型,觀察并記錄裸小鼠的生存狀態(tài)以及開始出現(xiàn)瘤結節(jié)的時間,同時游標卡尺測量瘤體的長軸、短軸計算移植瘤體積,繪制生長曲線。30天后斷頸處死所有組別的裸小鼠,摘取瘤組織,通過免疫組織化學和蛋白印記檢測法對CCNG2、p53、mdm2蛋白進行定性、定量檢測,觀察CCNG2過表達對瘤體的體內(nèi)抑制效應。結果1裸鼠移植瘤成瘤情況及裸鼠成長狀況。K1細胞組、LV-CCNG2細胞組、LV-GFP-Puro細胞組分別在接種細胞懸液后長出瘤結節(jié),成瘤率100%。LVCCNG2細胞組裸鼠體重明顯大于其他兩組,其差異具有統(tǒng)計學意義(F=7.112,P0.005);K1細胞組和LV-GFP-Puro細胞組裸鼠體重無統(tǒng)計學差異(P0.05)。2裸鼠皮下移植瘤生長曲線。LV-CCNG2細胞組裸鼠移植瘤成瘤時間延遲、瘤組織體積及生長速度緩慢,平均體積明顯小于K1細胞組和LV-GFP-Puro細胞組(F=54.983,P0.05),體積抑瘤率為67.07%。細胞懸液接種裸鼠后所形成的腫瘤組織的體積在不同時間觀察發(fā)現(xiàn)總體積同時也存在差異(F=267.128,P0.05)。K1細胞組及LV-GFP-Puro細胞組相比較,移植瘤的生長趨勢均無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。LV-CCNG2細胞組在轉(zhuǎn)染初期,移植瘤生長速度明顯減慢,實驗后期其生長速度有加快趨勢,但仍然低于K1細胞組及LV-GFP-Puro細胞組。3裸鼠移植瘤重量的變化。LV-CCNG2細胞組平均腫瘤質(zhì)量低于K1細胞組及LV-GFP-Puro細胞組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。K1細胞組和LV-GFPPuro細胞組相比較移植瘤體積和平均腫瘤質(zhì)量均無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。4免疫組織化學檢測結果。LV-CCNG2細胞組裸鼠瘤組織中CCNG2、p53、mdm2蛋白陽性率較陰性轉(zhuǎn)染對照組及空白對照組明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。K1細胞組與LV-K1-NC細胞組比較,移植瘤中CCNG2、p53、mdm2蛋白表達量均無明顯的統(tǒng)計學意義(P0.05)。5 Western blotting檢測結果。LV-CCNG2細胞組CCNG2、P53、mdm2蛋白表達量明顯高于K1細胞組和LVK1-NC細胞組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。K1細胞組和LV-GFP-Puro細胞組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論通過慢病毒介導過表達CCNG2基因有效升高裸鼠皮下移植瘤組織中CCNG2基因表達,有效延長K1細胞成瘤時間和生長速度,裸鼠移植瘤的重量、體積均相應減少。CCNG2基因有可能成為治療甲狀腺癌的新的靶分子。
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R736.1
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本文編號：1196076