本文關(guān)鍵詞：GP73在肝癌細(xì)胞侵襲和遷移過程中的作用

  更多相關(guān)文章： RNA干擾 高爾基體蛋白73 肝細(xì)胞癌 侵襲 遷移

【摘要】：目的:探討RNA干擾技術(shù)(RNAi)沉默人肝癌細(xì)胞中高爾基體蛋白73(GP73)基因表達(dá)后,對其侵襲和遷移能力的影響,并探索其相關(guān)機(jī)制,為將該基因應(yīng)用于肝癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)。方法:1.根據(jù)GP73序列和siRNA的設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)合成一條靶向GP73基因的小干擾RNA(siRNA),應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體法將設(shè)計(jì)合成的GP73 siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2和SMMC7721細(xì)胞。采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法檢測轉(zhuǎn)染后2株細(xì)胞GP73 mRNA和蛋白表達(dá)水平變化;2.按最佳轉(zhuǎn)染條件沉默GP73基因的表達(dá)后,采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察HepG2和SMMC7721細(xì)胞侵襲能力改變,采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)以及劃痕愈合實(shí)驗(yàn)分別觀察其縱向和橫向遷移能力改變;3.qRT-PCR和Western blot法檢測侵襲相關(guān)因子及通路蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Snail)、波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)情況,探索沉默GP73基因后影響細(xì)胞侵襲和遷移能力的潛在機(jī)制。結(jié)果:1.GP73 si RNA能顯著降低HepG2和SMMC7721細(xì)胞中GP73 mRNA和蛋白的表達(dá);2.GP73 siRNA沉默GP73基因的表達(dá)后,HepG2和SMMC7721細(xì)胞的侵襲和遷移能力均較對照組明顯降低;3.有效沉默GP73后,qRT-PCR結(jié)果顯示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin的mRNA表達(dá)水平有所降低,而E-cadherin mRNA表達(dá)水平有所升高;相應(yīng)地,Western blot結(jié)果也顯示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin的蛋白表達(dá)水平有所降低,但E-cadherin的蛋白表達(dá)水平有所升高。結(jié)論:1.GP73 siRNA可明顯降低GP73基因在HepG2和SMMC7721細(xì)胞中的表達(dá)水平;2.GP73 siRNA有效沉默GP73基因表達(dá)后,HepG2和SMMC7721細(xì)胞的侵襲和遷移能力均受到明顯抑制;3.GP73 siRNA干擾介導(dǎo)GP73基因沉默后,可能是通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平來抑制肝癌細(xì)胞侵襲和遷移能力,還可能通過Snail/E-cadherin/Vimentin信號(hào)通路來抑制其侵襲和遷移;4.GP73可以成為肝癌基因治療的靶標(biāo)基因。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊甲梅;闞彤;;肝癌的局部微創(chuàng)治療[J];肝膽外科雜志;2008年06期

2 王紅梅;趙秀娟;喬振華;;晚期肝癌化療結(jié)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸注療效觀察[J];臨床醫(yī)藥實(shí)踐;2009年13期

3 王琮;孫一予;李小江;;中藥聯(lián)合熱療在肝癌治療中的應(yīng)用[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年09期

4 李波;;復(fù)發(fā)肝癌診治現(xiàn)狀及策略[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2013年05期

5 ;肝癌[J];中國醫(yī)學(xué)文摘.內(nèi)科學(xué);1981年01期

6 陳寶珍;肝癌1、2號(hào)方配合化療對中晚期肝癌治療48例臨床分析[J];海南醫(yī)學(xué);1991年01期

7 王清水，林鎮(zhèn)和，吳淑貝，，王湘英;選擇性肝動(dòng)脈插管栓塞化療治療中晚期肝癌33例報(bào)告[J];福建醫(yī)藥雜志;1994年06期

8 楊昆;征服肝癌還有多遠(yuǎn)[J];w攣胖蕓

本文編號(hào)：1193875