本文關(guān)鍵詞：紅曲色素對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的影響及其機(jī)理初步研究

  更多相關(guān)文章： 紅曲色素 MDA-MB-231 腫瘤 凋亡 遷移 PI3K

【摘要】：紅曲色素是紫色紅曲菌發(fā)酵的次級(jí)代謝產(chǎn)物,其具有降血脂、抗氧化、抗炎癥和抗癌等功能。目前研究其對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的工作較少,特別是機(jī)理研究。本論文以紅曲色素為干擾物質(zhì),以無(wú)靶點(diǎn)、高轉(zhuǎn)移率的惡性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為癌細(xì)胞模型,從MTS實(shí)驗(yàn)、流式凋亡實(shí)驗(yàn)、Hoechst染色、HE染色、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)分析紅曲色素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的作用；利用蛋白芯片和RT-qPCR初步探究紅曲色素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的作用機(jī)制。通過(guò)本論文的研究發(fā)現(xiàn)：1.紅曲色素能抑帶MDA-MB-231細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡。選用0 μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL、300 μg/mL的紅曲色素分別處理MDA-MB-231細(xì)胞,利用MTS實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞流式儀和Hoechst染色法在不同時(shí)間(12 h、24 h、48 h)檢測(cè)細(xì)胞的存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖的效果隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)和紅曲色素濃度的增大而增強(qiáng),當(dāng)紅曲色素濃度為300μg/mL,處理時(shí)間為24 h時(shí),MDA-MB-231細(xì)胞的存活率為50%。2.紅曲色素可改變MDA-MB-231的細(xì)胞形態(tài)。選用0 μg/mL、100 μg/mL、 200μg/mL、300μg/mL的紅曲色素處理MDA-MB-231細(xì)胞24 h(HE染色),結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨紅曲色素濃度的增加,細(xì)胞形態(tài)變化顯著,由典型的梭形細(xì)胞變成不規(guī)則的多邊形細(xì)胞,細(xì)胞變小變圓,細(xì)胞核質(zhì)區(qū)分不明顯。3.紅曲色素能抑制MDA-MB-231細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。本課題選用0 μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL、300 μg/mL的紅曲色素分別處理MDA-MB-231細(xì)胞,利用劃痕實(shí)驗(yàn)在不同時(shí)間(12 h、24 h、48 h)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素抑制MDA-MB-231細(xì)胞遷移的效果隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)和紅曲色素濃度的增大而增強(qiáng)。根據(jù)劃痕結(jié)果,選用與劃痕實(shí)驗(yàn)相同濃度的紅曲色素處理MDA-MB-231細(xì)胞24 h (Transwell法),結(jié)果發(fā)現(xiàn),細(xì)胞的穿膜數(shù)目隨紅曲色素濃度的增加而顯著性減少,這說(shuō)明紅曲色素可抑制]MDA-MB-231細(xì)胞的體外侵襲。以上實(shí)驗(yàn)表明,紅曲色素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞有抑制增殖、促進(jìn)凋亡、改變細(xì)胞形態(tài)和抑制運(yùn)動(dòng)能力的作用。為了探討產(chǎn)生此種現(xiàn)象的機(jī)制,本論文采用蛋白抗體芯片、RT-qPCR實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行分析。蛋白抗體芯片結(jié)果表明,98種蛋白有顯著性差異表達(dá),其中7種蛋白表達(dá)上調(diào)(fold change≥2.0),91種蛋白表達(dá)下調(diào)(fold change≤0.5)。對(duì)差異性蛋白進(jìn)行生物功能分析后,可發(fā)現(xiàn)與現(xiàn)象相關(guān)的功能有細(xì)胞有絲分裂、細(xì)胞粘附能力、應(yīng)激反應(yīng)、腫瘤信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等等,這些功能可能正是引起乳腺癌細(xì)胞增殖凋亡和運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生變化的主要原因。選取跟細(xì)胞粘附作用相關(guān)的蛋白(KRT19、TYMP和CD44)做RT-qPCR分析發(fā)現(xiàn)KRT19mRNA和TYMP mRNA表達(dá)上調(diào),CD44 mRNA表達(dá)下調(diào),該結(jié)果與mRNA相對(duì)應(yīng)蛋白的表達(dá)變化一致(即與抗體芯片結(jié)果一致)。對(duì)抗體芯片篩選出的98種表達(dá)有顯著性差異的蛋白,采用KEGG法分析與之相關(guān)的細(xì)胞通路,結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用,其主要與PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)�；谏鲜鰧�(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究證實(shí)紅曲色素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和遷移有抑制作用。其可能的作用機(jī)制一是促進(jìn)了MDA-MD-231的細(xì)胞凋亡,二是下調(diào)與腫瘤遷移相關(guān)的基因表達(dá)。本研究揭示紅曲色素對(duì)MDA-MB-231的影響主要依賴(lài)于細(xì)胞的PI3K-AKT信號(hào)通路。本研究的成果為進(jìn)一步探討利用紅曲色素治療惡性腫瘤奠定了基礎(chǔ),為紅曲色素的開(kāi)發(fā)利用提供一個(gè)新的方向。
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9;TS264.4

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