本文關(guān)鍵詞：紅曲色素對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的影響及其機(jī)理初步研究

  更多相關(guān)文章： 紅曲色素 MDA-MB-231 腫瘤 凋亡 遷移 PI3K

【摘要】：紅曲色素是紫色紅曲菌發(fā)酵的次級代謝產(chǎn)物,其具有降血脂、抗氧化、抗炎癥和抗癌等功能。目前研究其對MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的工作較少,特別是機(jī)理研究。本論文以紅曲色素為干擾物質(zhì),以無靶點、高轉(zhuǎn)移率的惡性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為癌細(xì)胞模型,從MTS實驗、流式凋亡實驗、Hoechst染色、HE染色、細(xì)胞侵襲實驗、劃痕實驗分析紅曲色素對MDA-MB-231細(xì)胞的作用；利用蛋白芯片和RT-qPCR初步探究紅曲色素對MDA-MB-231細(xì)胞的作用機(jī)制。通過本論文的研究發(fā)現(xiàn)：1.紅曲色素能抑帶MDA-MB-231細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡。選用0 μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL、300 μg/mL的紅曲色素分別處理MDA-MB-231細(xì)胞,利用MTS實驗、細(xì)胞流式儀和Hoechst染色法在不同時間(12 h、24 h、48 h)檢測細(xì)胞的存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖的效果隨著處理時間的延長和紅曲色素濃度的增大而增強(qiáng),當(dāng)紅曲色素濃度為300μg/mL,處理時間為24 h時,MDA-MB-231細(xì)胞的存活率為50%。2.紅曲色素可改變MDA-MB-231的細(xì)胞形態(tài)。選用0 μg/mL、100 μg/mL、 200μg/mL、300μg/mL的紅曲色素處理MDA-MB-231細(xì)胞24 h(HE染色),結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨紅曲色素濃度的增加,細(xì)胞形態(tài)變化顯著,由典型的梭形細(xì)胞變成不規(guī)則的多邊形細(xì)胞,細(xì)胞變小變圓,細(xì)胞核質(zhì)區(qū)分不明顯。3.紅曲色素能抑制MDA-MB-231細(xì)胞的運(yùn)動能力。本課題選用0 μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL、300 μg/mL的紅曲色素分別處理MDA-MB-231細(xì)胞,利用劃痕實驗在不同時間(12 h、24 h、48 h)檢測細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素抑制MDA-MB-231細(xì)胞遷移的效果隨著處理時間的延長和紅曲色素濃度的增大而增強(qiáng)。根據(jù)劃痕結(jié)果,選用與劃痕實驗相同濃度的紅曲色素處理MDA-MB-231細(xì)胞24 h (Transwell法),結(jié)果發(fā)現(xiàn),細(xì)胞的穿膜數(shù)目隨紅曲色素濃度的增加而顯著性減少,這說明紅曲色素可抑制]MDA-MB-231細(xì)胞的體外侵襲。以上實驗表明,紅曲色素對MDA-MB-231細(xì)胞有抑制增殖、促進(jìn)凋亡、改變細(xì)胞形態(tài)和抑制運(yùn)動能力的作用。為了探討產(chǎn)生此種現(xiàn)象的機(jī)制,本論文采用蛋白抗體芯片、RT-qPCR實驗對其進(jìn)行分析。蛋白抗體芯片結(jié)果表明,98種蛋白有顯著性差異表達(dá),其中7種蛋白表達(dá)上調(diào)(fold change≥2.0),91種蛋白表達(dá)下調(diào)(fold change≤0.5)。對差異性蛋白進(jìn)行生物功能分析后,可發(fā)現(xiàn)與現(xiàn)象相關(guān)的功能有細(xì)胞有絲分裂、細(xì)胞粘附能力、應(yīng)激反應(yīng)、腫瘤信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等等,這些功能可能正是引起乳腺癌細(xì)胞增殖凋亡和運(yùn)動能力產(chǎn)生變化的主要原因。選取跟細(xì)胞粘附作用相關(guān)的蛋白(KRT19、TYMP和CD44)做RT-qPCR分析發(fā)現(xiàn)KRT19mRNA和TYMP mRNA表達(dá)上調(diào),CD44 mRNA表達(dá)下調(diào),該結(jié)果與mRNA相對應(yīng)蛋白的表達(dá)變化一致(即與抗體芯片結(jié)果一致)。對抗體芯片篩選出的98種表達(dá)有顯著性差異的蛋白,采用KEGG法分析與之相關(guān)的細(xì)胞通路,結(jié)果發(fā)現(xiàn),紅曲色素對MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用,其主要與PI3K/Akt信號通路相關(guān)�；谏鲜鰧嶒灲Y(jié)果,本研究證實紅曲色素對MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和遷移有抑制作用。其可能的作用機(jī)制一是促進(jìn)了MDA-MD-231的細(xì)胞凋亡,二是下調(diào)與腫瘤遷移相關(guān)的基因表達(dá)。本研究揭示紅曲色素對MDA-MB-231的影響主要依賴于細(xì)胞的PI3K-AKT信號通路。本研究的成果為進(jìn)一步探討利用紅曲色素治療惡性腫瘤奠定了基礎(chǔ),為紅曲色素的開發(fā)利用提供一個新的方向。
【學(xué)位授予單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9;TS264.4

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張玳華;何佳;趙啟美;;一株紫色紅曲霉產(chǎn)紅曲色素優(yōu)化條件的研究[J];山東食品發(fā)酵;2000年02期

2 張景強(qiáng);紅曲色素的研究概況[J];冷飲與速凍食品工業(yè);2001年04期

3 連喜軍,王昌祿,顧曉波,李瀅;紅曲色素光穩(wěn)定性研究現(xiàn)狀及展望[J];肉類研究;2003年02期

4 童群義;紅曲色素的研究進(jìn)展[J];食品研究與開發(fā);2003年01期

5 顏延寧;;紅曲色素的研究進(jìn)展[J];廣西輕工業(yè);2007年02期

6 崔莉;張德權(quán);張培正;;紅曲色素的研究現(xiàn)狀分析[J];食品科技;2008年08期

7 嵇豪;蔣冬花;葉硯;周琴;王長春;;紅曲色素的提取工藝及其穩(wěn)定性研究[J];中國調(diào)味品;2010年07期

8 李明起;陳運(yùn)中;;紅曲色素提取工藝條件的實驗研究[J];肉類工業(yè);2011年04期

9 錢敏;梁彬霞;白衛(wèi)東;楊曉暾;趙文紅;朱豪;;紅曲色素提取及分離純化研究[J];中國調(diào)味品;2012年03期

10 臧晉;田進(jìn)軍;孟大印;于秀立;;紅曲色素提取條件的優(yōu)化[J];中國調(diào)味品;2012年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 謝寶貴;唐航鷹;江玉姬;;紅曲色素高產(chǎn)菌株的篩選[A];中國菌物學(xué)會第三屆會員代表大會暨全國第六屆菌物學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 ;紅曲色素及其在肉制品中的應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

2 ;紅曲色素及其在肉制品中的應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

3 王強(qiáng);紅曲色素在肉制品中應(yīng)用狀況分析[N];中國食品質(zhì)量報;2007年

4 ;紅曲色素及其在肉制品中的應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

5 ;紅曲色素及其在肉制品中的應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 連喜軍;紅曲色素光穩(wěn)定性的研究[D];天津科技大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張皓雪;天然紅曲色素標(biāo)準(zhǔn)品的研制[D];浙江工業(yè)大學(xué);2013年

2 徐美愛;產(chǎn)紅曲色素和糖化優(yōu)良菌株的選育及發(fā)酵條件研究[D];福州大學(xué);2014年

3 田園;微生物和銨鹽對紅曲色素代謝合成的影響及其機(jī)理的初步研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2016年

4 李艷;紅曲色素對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的影響及其機(jī)理初步研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2016年

5 王瑩;紅曲色素的純化、鑒定及光穩(wěn)定性研究[D];天津科技大學(xué);2008年

6 趙倩;紅曲色素?zé)岱�(wěn)定性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 簡文杰;分子模擬在紅曲色素分子修飾及功能設(shè)計上的應(yīng)用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2007年

8 王陽陽;紅曲色素衍生物的制備與表征[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

9 于慧慧;紅曲色素對冷鮮肉保鮮效果及抑菌機(jī)理研究[D];齊魯工業(yè)大學(xué);2013年

10 張帝;紅曲霉發(fā)酵產(chǎn)紅曲色素及其穩(wěn)定性研究[D];安徽工程大學(xué);2014年

，

本文編號：1187898