本文關(guān)鍵詞：靶向CD138嵌合抗原受體的表達(dá)優(yōu)化及其對多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞殺傷影響

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【摘要】：研究背景：多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma, MM)是第二常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,克隆性漿細(xì)胞在骨髓及髓外病灶積聚,并最終引起腎衰竭,免疫抑制伴反復(fù)感染,貧血以及骨質(zhì)損傷。盡管MM的治療有了長足的進(jìn)步,但至今仍是不可治愈的惡性疾病,絕大多數(shù)的患者最終會復(fù)發(fā)或進(jìn)展。嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞(Chimeric antigen receptors modified T cells, CAR-T)已成為當(dāng)下腫瘤免疫治療和靶向治療的研究熱點(diǎn),尤其是靶向CD19 CAR-T細(xì)胞治療在CD19陽性B細(xì)胞惡性腫瘤中取得的顯著療效。CARs技術(shù)在MM治療領(lǐng)域的應(yīng)用研究可能為MM患者的預(yù)后帶來新的希望。目的：本研究選擇了CD1 38作為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)對應(yīng)的CAR結(jié)構(gòu),通過更換具有更高表達(dá)活性的啟動子優(yōu)化載有CAR基因片段的基因載體,增加CARs的表達(dá)水平,比較優(yōu)化前后的CAR-T細(xì)胞對CD138陽性MM細(xì)胞系RPMI8226的殺傷活性。方法：(1)構(gòu)建載有CAR基因及不同啟動子的基因載體；(2)驗(yàn)證啟動子對下游CAR基因的表達(dá)活性；(3)制備優(yōu)化前后兩組靶向CD138CAR-T細(xì)胞、流式細(xì)胞術(shù)檢測；(4)將靶向CD138 CAR-T細(xì)胞與RPMI8226細(xì)胞共培養(yǎng)、檢測殺傷活性。結(jié)果：(1)成功構(gòu)建了本試驗(yàn)所需要的基因載體；(2)優(yōu)化后基因載體具有更高表達(dá)活性；(3)成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細(xì)胞,陽性率分別為13.32%與10.16%；(4)在不同效靶比的情況下,CAR-T組的殺傷活性均高于CIK組,且P0.05,具有顯著差異；不同效靶比下,PWPXL-CAR-T組的殺傷活性均高于PWPT-CAR-T組,T檢驗(yàn)P0.05,差異不顯著.結(jié)論：(1)啟動子EF-1α比EF-1α-short具有更高的表達(dá)活性,可以用于增加CAR-T細(xì)胞表面CARs的表達(dá)水平,說明在啟動子水平優(yōu)化CAR基因載體以提高細(xì)胞表面CARs表達(dá)水平是可行的；(2)本研究成功制備了優(yōu)化前后兩組靶向CD138 CAR-T細(xì)胞：(3)靶向CD138 CAR-T細(xì)胞與未經(jīng)基因修飾的CIK細(xì)胞相比對CD138陽性的RPMI8226細(xì)胞具有增強(qiáng)的殺傷活性；(4)增加靶向CD138CAR-T細(xì)胞表面CARs的表達(dá)水平可能會增加它對CD1 38陽性RPMI8226細(xì)胞的殺傷活性。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
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本文編號：1186342