本文關(guān)鍵詞：MTA2在食管癌組織中的表達(dá)調(diào)控及其功能機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 食管癌 MTA2 Sp1 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 eIF4E 裸鼠移植瘤

【摘要】：目的:研究轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2(MTA2)在食管癌組織中的表達(dá)及調(diào)控,和對(duì)食管癌細(xì)胞體內(nèi)外增殖、遷移和侵襲能力的影響,并探討MTA2促進(jìn)食管癌細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變的可能機(jī)制。方法:1應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)正常食管上皮組織、癌旁組織和癌組織中MTA2、Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A的表達(dá),并分析MTA2與Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A表達(dá)水平的相關(guān)性,同時(shí)分析MTA2的表達(dá)水平與食管癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。2應(yīng)用western blot和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常食管上皮組織和食管癌組織中MTA2蛋白的表達(dá)。3應(yīng)用MTS法,Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲低MTA2對(duì)食管癌細(xì)胞增殖活性、遷移和侵襲能力的影響。4應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲低MTA2后對(duì)EMT相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。5應(yīng)用western blot法檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲低MTA2后對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。6應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)敲低MTA2后對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。7應(yīng)用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MTA2能否與Twist相結(jié)合。8應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和western blot檢測(cè)正常食管上皮組織及癌組織中e IF4E的基因和蛋白表達(dá)水平。9應(yīng)用Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)及western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低MTA2同時(shí)過(guò)表達(dá)e IF4E對(duì)食管癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響以及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。10應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表達(dá)情況。11應(yīng)用western blot檢測(cè)裸鼠移植瘤中EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織和癌旁組織相比,食管癌組織中MTA2的表達(dá)上調(diào)(P0.05),且食管癌組織中MTA2與Sp1的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.407,P0.05),而食管癌組織中MTA2與mi R146A、mi R149、mi R34A的表達(dá)水平均無(wú)相關(guān)性(P0.05)。食管癌組織中MTA2的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、分化程度和腫瘤大小無(wú)關(guān)(P0.05),而與腫瘤的TNM分期和淋巴結(jié)浸潤(rùn)有關(guān)(P0.05)。2 Western blot與免疫組織化學(xué)結(jié)果均顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中MTA2蛋白的表達(dá)水平有升高的趨勢(shì)。3 MTS法檢測(cè)結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠抑制食管癌KYSE30與KYSE510細(xì)胞的增殖活性(P0.05),而過(guò)表達(dá)MTA2對(duì)食管癌KYSE30與KYSE510細(xì)胞的增殖活性具有促進(jìn)作用(P0.05)。4 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠抑制食管癌KYSE30與KYSE510細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P0.05),過(guò)表達(dá)MTA2能夠促進(jìn)食管癌KYSE30與KYSE510細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P0.05)。5實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)和western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠促進(jìn)E-cadherin基因和蛋白的表達(dá)(P0.05),降低N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達(dá)(P0.05);過(guò)表達(dá)MTA2能夠降低E-cadherin基因和蛋白的表達(dá)(P0.05),促進(jìn)N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達(dá)(P0.05)。6細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠促進(jìn)E-cadherin的表達(dá),降低N-cadherin和Vimentin的表達(dá)。7免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MTA2在食管癌細(xì)胞中能夠與Twist蛋白相結(jié)合。8實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中e IF4E的表達(dá)水平明顯增高(P0.05),且食管癌組織中e IF4E與MTA2的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.418,P=0.001)。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中e IF4E的蛋白表達(dá)水平也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。9敲低MTA2能夠明顯降低e IF4E和p-e IF4E的表達(dá)(P0.05)。與單獨(dú)轉(zhuǎn)染si-MTA2組相比,過(guò)表達(dá)e IF4E能夠逆轉(zhuǎn)敲低MTA2對(duì)食管癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響(P0.05),并降低食管癌細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)水平(P0.05),使N-cadherin、Vimentin的表達(dá)水平升高(P0.05)。10免疫組織化學(xué)法檢測(cè)到MTA2過(guò)表達(dá)組的裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表達(dá)水平均高于空載體組。11 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MTA2過(guò)表達(dá)組裸鼠移植瘤與空載體組移植瘤相比,N-cadherin、Vimentin的表達(dá)有升高的趨勢(shì),而E-cadherin的表達(dá)水平有降低的趨勢(shì)。結(jié)論:食管癌中MTA2的表達(dá)水平上調(diào),可能與轉(zhuǎn)錄因子Sp1的表達(dá)水平升高有關(guān)。MTA2在體內(nèi)和體外均能夠促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖活性;在體外還能夠促進(jìn)食管癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,促進(jìn)食管癌細(xì)胞發(fā)生EMT,這一過(guò)程可能與促進(jìn)p-e IF4E的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 孫文;鐘廣正;于浩;黃立;林天歆;;miR-34a在膀胱癌中下調(diào)MTA2表達(dá)的研究[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2014年03期

2 ;Caveolin-1,E-cadherin and β-catenin in Gastric Carcinoma,Precancerous Tissues and Chronic Non-atrophic Gastritis[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年01期

3 王術(shù)華;齊艷麗;張俊毅;張清富;李海英;邱雪杉;;MTA2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)肺癌雜志;2010年08期

4 何春蘭;苗毅;陳平;;MTA1和MTA3與ER在乳腺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2009年05期

5 趙守華;赫捷;;食管癌早期診斷的研究進(jìn)展[J];腫瘤;2008年02期

6 冀予心;張萍;盧運(yùn)萍;馬丁;;Expression of MTA2 Gene in Ovarian Epithelial Cancer and Its Clinical Implication[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)英德文版);2006年03期

，

本文編號(hào)：1185649