本文關(guān)鍵詞：MTA2在食管癌組織中的表達調(diào)控及其功能機制的研究

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【摘要】：目的:研究轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2(MTA2)在食管癌組織中的表達及調(diào)控,和對食管癌細胞體內(nèi)外增殖、遷移和侵襲能力的影響,并探討MTA2促進食管癌細胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變的可能機制。方法:1應(yīng)用實時熒光定量PCR法檢測正常食管上皮組織、癌旁組織和癌組織中MTA2、Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A的表達,并分析MTA2與Sp1、mi R146A、mi R149、mi R34A表達水平的相關(guān)性,同時分析MTA2的表達水平與食管癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。2應(yīng)用western blot和免疫組織化學法檢測正常食管上皮組織和食管癌組織中MTA2蛋白的表達。3應(yīng)用MTS法,Transwell遷移和侵襲實驗檢測過表達或敲低MTA2對食管癌細胞增殖活性、遷移和侵襲能力的影響。4應(yīng)用實時熒光定量PCR法檢測過表達或敲低MTA2后對EMT相關(guān)基因表達水平的影響。5應(yīng)用western blot法檢測過表達或敲低MTA2后對EMT相關(guān)蛋白表達水平的影響。6應(yīng)用細胞免疫熒光法檢測敲低MTA2后對EMT相關(guān)蛋白表達水平的影響。7應(yīng)用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)實驗檢測MTA2能否與Twist相結(jié)合。8應(yīng)用實時熒光定量PCR法和western blot檢測正常食管上皮組織及癌組織中e IF4E的基因和蛋白表達水平。9應(yīng)用Transwell遷移和侵襲實驗及western blot實驗檢測敲低MTA2同時過表達e IF4E對食管癌細胞遷移和侵襲能力的影響以及EMT相關(guān)蛋白表達水平的變化。10應(yīng)用免疫組織化學法檢測裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表達情況。11應(yīng)用western blot檢測裸鼠移植瘤中EMT相關(guān)蛋白的表達情況。結(jié)果:1實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織和癌旁組織相比,食管癌組織中MTA2的表達上調(diào)(P0.05),且食管癌組織中MTA2與Sp1的表達水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.407,P0.05),而食管癌組織中MTA2與mi R146A、mi R149、mi R34A的表達水平均無相關(guān)性(P0.05)。食管癌組織中MTA2的表達水平與患者的年齡、性別、分化程度和腫瘤大小無關(guān)(P0.05),而與腫瘤的TNM分期和淋巴結(jié)浸潤有關(guān)(P0.05)。2 Western blot與免疫組織化學結(jié)果均顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中MTA2蛋白的表達水平有升高的趨勢。3 MTS法檢測結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠抑制食管癌KYSE30與KYSE510細胞的增殖活性(P0.05),而過表達MTA2對食管癌KYSE30與KYSE510細胞的增殖活性具有促進作用(P0.05)。4 Transwell實驗結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠抑制食管癌KYSE30與KYSE510細胞的遷移和侵襲能力(P0.05),過表達MTA2能夠促進食管癌KYSE30與KYSE510細胞的遷移和侵襲能力(P0.05)。5實時熒光定量PCR實驗和western blot實驗結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠促進E-cadherin基因和蛋白的表達(P0.05),降低N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達(P0.05);過表達MTA2能夠降低E-cadherin基因和蛋白的表達(P0.05),促進N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達(P0.05)。6細胞免疫熒光實驗結(jié)果顯示,敲低MTA2能夠促進E-cadherin的表達,降低N-cadherin和Vimentin的表達。7免疫共沉淀實驗結(jié)果顯示,MTA2在食管癌細胞中能夠與Twist蛋白相結(jié)合。8實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中e IF4E的表達水平明顯增高(P0.05),且食管癌組織中e IF4E與MTA2的表達水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.418,P=0.001)。Western blot實驗結(jié)果顯示,與正常食管上皮組織相比,食管癌組織中e IF4E的蛋白表達水平也呈現(xiàn)上升趨勢。9敲低MTA2能夠明顯降低e IF4E和p-e IF4E的表達(P0.05)。與單獨轉(zhuǎn)染si-MTA2組相比,過表達e IF4E能夠逆轉(zhuǎn)敲低MTA2對食管癌細胞遷移和侵襲能力的影響(P0.05),并降低食管癌細胞中E-cadherin的表達水平(P0.05),使N-cadherin、Vimentin的表達水平升高(P0.05)。10免疫組織化學法檢測到MTA2過表達組的裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表達水平均高于空載體組。11 Western blot實驗結(jié)果顯示,MTA2過表達組裸鼠移植瘤與空載體組移植瘤相比,N-cadherin、Vimentin的表達有升高的趨勢,而E-cadherin的表達水平有降低的趨勢。結(jié)論:食管癌中MTA2的表達水平上調(diào),可能與轉(zhuǎn)錄因子Sp1的表達水平升高有關(guān)。MTA2在體內(nèi)和體外均能夠促進食管癌細胞的增殖活性;在體外還能夠促進食管癌細胞的遷移和侵襲能力,促進食管癌細胞發(fā)生EMT,這一過程可能與促進p-e IF4E的表達有關(guān)。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 孫文;鐘廣正;于浩;黃立;林天歆;;miR-34a在膀胱癌中下調(diào)MTA2表達的研究[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2014年03期

2 ;Caveolin-1,E-cadherin and β-catenin in Gastric Carcinoma,Precancerous Tissues and Chronic Non-atrophic Gastritis[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年01期

3 王術(shù)華;齊艷麗;張俊毅;張清富;李海英;邱雪杉;;MTA2在非小細胞肺癌中的表達及意義[J];中國肺癌雜志;2010年08期

4 何春蘭;苗毅;陳平;;MTA1和MTA3與ER在乳腺癌組織中的表達及相關(guān)性研究[J];中國現(xiàn)代普通外科進展;2009年05期

5 趙守華;赫捷;;食管癌早期診斷的研究進展[J];腫瘤;2008年02期

6 冀予心;張萍;盧運萍;馬丁;;Expression of MTA2 Gene in Ovarian Epithelial Cancer and Its Clinical Implication[J];華中科技大學學報(醫(yī)學英德文版);2006年03期

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本文編號：1185649