本文關(guān)鍵詞：紫衫烷化合物抑制肝癌細(xì)胞增殖活性及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 紅豆杉 紫杉烷類化合物 肝癌 凋亡 p53 Bax

【摘要】：隨著紫杉醇及其前體物在臨床上的廣泛應(yīng)用,導(dǎo)致其需求量不斷增加,因此,新的生物資源的開發(fā)與尋找已經(jīng)迫在眉急。近年大量的紫杉醇類似物被學(xué)者們提取分離得到,但是截止到目前,仍然沒有第二代紫杉醇藥物上市。所以,對(duì)于新的紫杉烷類藥物的研究主要是尋找高效低毒以及對(duì)多種腫瘤細(xì)胞,尤其是對(duì)具有耐藥性的人體腫瘤細(xì)胞有較高抑制活性的紫杉烷類化合物。本研究以從東北紅豆杉和加拿大紅豆杉可再生小枝和針葉中分離純化的23種紫杉烷類化合物為象,檢測(cè)了它們對(duì)人肝腫瘤細(xì)胞增殖的作用,篩選出三種可明顯抑制人肝腫瘤細(xì)胞增殖的化合物,并對(duì)化合物Taxinine抗腫瘤的作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討,這對(duì)于擴(kuò)大紫杉藥源,尋找和開發(fā)新的抗癌先導(dǎo)化合物或藥物都具有非常重要的意義。第一部分紫杉烷類化合物體外抗人肝癌活性篩選目的:隨著近年來對(duì)紫杉醇及其前體物的需求量不斷攀升,為了緩解紫杉醇供不應(yīng)求的局面,本研究以東北紅豆杉和加拿大紅豆杉可再生小枝和針葉中分離純化的23種紫杉烷類化合物為研究對(duì)象,對(duì)人肝腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性進(jìn)行了篩選,以篩選出對(duì)肝腫瘤細(xì)胞具有明顯抑制活性的化合物。方法:采用4-甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)23種紫杉烷類化合物對(duì)人肝腫瘤細(xì)胞增殖的作用,篩選出具有明顯抗人肝腫瘤細(xì)胞增殖作用的紫杉烷類化合物,并對(duì)藥物的濃度-效應(yīng)曲線以Hill數(shù)學(xué)模型擬合,計(jì)算藥物的的半數(shù)抑制濃度(IC50值)。結(jié)果:10μmol/L的順鉑和10μmol/L紫杉醇作用于人肝腫瘤細(xì)胞(Hep G2)后,均顯示了非常強(qiáng)的增殖抑制活性,增殖抑制率分別為71.02%和78.93%;10μmol/L的23種紫杉烷類化合物處理Hep G2細(xì)胞后,化合物taxine II(11)、taxinine L(20)和taxuspine F[13](22)1β-hydroxyl-taxinine[13]、22均顯示出與順鉑和紫杉醇相似或者強(qiáng)于它們的細(xì)胞增殖抑制活性;其他20種化合物對(duì)Hep G2細(xì)胞的增殖則無明顯抑制活性。通過腫瘤細(xì)胞增殖生存率對(duì)化合物11、20、22濃度的對(duì)數(shù)回歸方程,得到三種化合物對(duì)Hep G2細(xì)胞增殖的IC50,分別為0.15、3.75和4.91μmol/L。結(jié)論:從東北紅豆杉和加拿大紅豆杉可再生小枝和針葉中分離純化的3種紫杉烷類化合物11、20和22對(duì)人肝腫瘤細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制活性;抗人肝腫瘤細(xì)胞的增殖活性不僅與紫杉烷類化合物的骨架結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系,而且還與C-5位的脂溶性肉桂�；鶄�(cè)鏈密切相關(guān)。第二部分Taxinine抗癌作用機(jī)制研究目的:大量的研究報(bào)道中發(fā)現(xiàn)中國(guó)傳統(tǒng)藥物中的很多成分均具有明顯的抗腫瘤活性,并且這些成分大多都是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來發(fā)揮抗腫瘤作用的。第一部分實(shí)驗(yàn)中篩選出來了三種紫杉烷類化合物對(duì)人肝腫瘤細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用。本部分實(shí)驗(yàn)將對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究,以明確上述化合物是否通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤細(xì)胞增殖活性。方法:1通過熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)來檢測(cè)凋亡信號(hào)通路中的相關(guān)報(bào)告基因Bax-Luc、p G13-Luc、h Noxa-Luc和p21-Luc以及胞內(nèi)其他信號(hào)通路的相關(guān)報(bào)告基因Ig K-Luc、SRE-Luc、CRE-Luc和NFAT-Luc:的表達(dá);2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)5μmol/L的紫杉烷類化合物Taxinine作用Hep G2細(xì)胞24h后細(xì)胞的凋亡;3 Western blot檢測(cè)紫杉烷類化合物Taxinine作用Hep G2細(xì)胞后p53、Bax和Caspase-3的變化;4 MTT法檢測(cè)Caspase抑制劑Z-VAD-FMK對(duì)Taxinine抑制人Hep G2增殖的翻轉(zhuǎn)作用。結(jié)果:1編號(hào)分別為11、20和22的的三種紫杉烷類化合物,以5μmol/L濃度處理Hep G2細(xì)胞,觀察其對(duì)Hep G2細(xì)胞報(bào)告基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,對(duì)于Hep G2細(xì)胞,11號(hào)化合物可明顯上調(diào)其胞內(nèi)p53依賴的凋亡信號(hào)通路中的相關(guān)報(bào)告基因Bax-Luc、p G13-Luc、h Noxa-Luc和p21-Luc的表達(dá),但是在其他信號(hào)通路的相關(guān)報(bào)告基因中如SRE-Luc、Ig K-Luc、NFAT-Luc和CRE-Luc,則沒有明顯作用,而另外兩種化合物對(duì)相關(guān)報(bào)告基因均不顯示誘導(dǎo)作用。2 Taxinine對(duì)Hep G2細(xì)胞凋亡的影響:5μmol/L的Taxinine處理Hep G2細(xì)胞24 h后,Hep G2細(xì)胞凋亡率為13.7%,與空白對(duì)照組5.8%比較,具有顯著性差異(P0.05),提示Taxinine對(duì)Hep G2細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用。3 Taxinine對(duì)Hep G2細(xì)胞內(nèi)p53蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白的上調(diào)作用:在5μmol/L的順鉑和Taxinine作用Hep G2細(xì)胞后,顯示細(xì)胞內(nèi)的p53、Bax和Caspase-3表達(dá)水平均顯著上升。4 Caspase抑制劑Z-VAD-FMK對(duì)Taxinine抑制細(xì)胞增殖的翻轉(zhuǎn)作用:0.1、1、10μmol/L的順鉑和Taxinine處理Hep G2細(xì)胞,其細(xì)胞生存率分別為95.10%、66.37%、21.27%和79.82%、31.87%、7.38%;20μmol/L的Z-VAD-FMK與順鉑和Taxinine共同處理Hep G2細(xì)胞后,其細(xì)胞生存率明顯上升,分別為100.00%、70.90%、36.34%和84.79%、45.67%、19.05%,Z-VAD-FMK能顯著翻轉(zhuǎn)Taxinine對(duì)Hep G2細(xì)胞的抑制作用。結(jié)論:紫杉烷類化合物Taxinine對(duì)人肝腫瘤Hep G2細(xì)胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡活性;Taxinine通過p53通路發(fā)揮抗人肝腫瘤Hep G2細(xì)胞增殖活性,p53增高,促進(jìn)Bax增高,進(jìn)一步引起Caspase-3增高,引起細(xì)胞凋亡;Z-VAD-FMK能夠翻轉(zhuǎn)Taxinine對(duì)Hep G2細(xì)胞的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 常海濤;紅豆杉種子中的新紫杉烷類化合物[J];中草藥;2000年04期

2 王春霖,曹聰梅,張Z誒，

本文編號(hào)：1184763