本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞凋亡影響CIK細(xì)胞抗腫瘤功能的作用及其調(diào)控機制

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【摘要】：目的:探討CIK細(xì)胞凋亡對其抗腫瘤功能的影響,并初步探討CIK細(xì)胞凋亡的機制。方法:倒置顯微鏡觀察健康人外周血來源的CIK細(xì)胞(PB-CIK)、臍帶血來源的CIK細(xì)胞(CB-CIK)、癌癥患者外周血來源的CIK細(xì)胞(PBP-CIK)在誘導(dǎo)過程中的形態(tài)變化,檢測3種CIK細(xì)胞生長情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測3種CIK細(xì)胞CD3、CD56分子表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測死亡受體Fas表達(dá)和CB-CIK殺傷腫瘤過程中及誘導(dǎo)過程中細(xì)胞凋亡。采用Calcein-AM法檢測CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。RT-PCR、Western blot檢測CB-CIK誘導(dǎo)過程中c-FLIP L、c-FLIPR、c-FLIPS m RNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果:3種不同來源的CIK細(xì)胞均在誘導(dǎo)7d后進(jìn)入指數(shù)生長期,但誘導(dǎo)14d時,PB-CIK、CB-CIK細(xì)胞數(shù)量可擴增100倍,PBP-CIK細(xì)胞數(shù)量可擴增40倍;PBP-CIK中CD3+CD56+細(xì)胞數(shù)量明顯少于CB-CIK、PB-CIK中CD3+CD56+細(xì)胞數(shù)量,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。誘導(dǎo)14d,三種來源的CIK細(xì)胞Fas表達(dá)均超過90%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;PBP-CIK細(xì)胞在誘導(dǎo)14d時的凋亡水平與PB-CIK、CB-CIK細(xì)胞凋亡水平相比,明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);效靶≥10:1時CIK凋亡水平下降,殺傷水平上升;Caspase3,Caspase8,Caspase9抑制劑分別作用后,CIK凋亡水平下降,CIK細(xì)胞殺傷腫瘤水平上升,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在誘導(dǎo)3d,CIK細(xì)胞凋亡水平最高,之后凋亡水平下降,c-FLIPR和c-FLIPS在誘導(dǎo)3d時表達(dá)水平最低,之后逐漸升高。結(jié)論:CB-CIK、PB-CIK細(xì)胞增殖能力明顯強于PBP-CIK細(xì)胞。CIK細(xì)胞誘導(dǎo)和殺傷腫瘤時均會發(fā)生凋亡并影響其抗腫瘤功能。c-FLIPS、c-FLIPR蛋白可能與CIK細(xì)胞凋亡與其抗腫瘤功能有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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