本文關(guān)鍵詞：Nestin在骨肉瘤中的表達(dá)及意義

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【摘要】：[目的1：骨肉瘤對(duì)青少年的危害極大,目前的治療方式主要包括手術(shù)治療聯(lián)合新的輔助化療,但是隨著患者出現(xiàn)了化療耐藥,導(dǎo)致患者的化療效果下降。本實(shí)驗(yàn)采取回顧性研究,探索骨肉瘤組織中Nestin表達(dá)與復(fù)發(fā)、預(yù)后及耐藥性的關(guān)系,同時(shí)對(duì)MG-63骨肉瘤細(xì)胞株、A172(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)和成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),分別采用免疫熒光、Western blot、PCR技術(shù)檢測(cè)Nestin表達(dá)并進(jìn)行對(duì)比,干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)變化。[材料與方法]第一部分Nestin在骨肉瘤組織中的表達(dá)及意義研究對(duì)象：對(duì)2003年1月到2014年10月中山大學(xué)第二附屬醫(yī)院(24例)和昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院(6例)診治的符合入組及排除標(biāo)準(zhǔn)的骨肉瘤患者進(jìn)行回顧性研究。方法：入院患者完善相關(guān)輔助檢查,包括血常規(guī),血生化,CT掃描,PET-CT掃描,MRI和骨掃描。通過(guò)問(wèn)診、體檢、查閱病歷、調(diào)閱影像資料,以性別、年齡、腫瘤部位、瘤體大小、單發(fā)或多發(fā)、是否存在病理性骨折、初診時(shí)血清堿性磷酸酶濃度、初診時(shí)血清乳酸脫氫酶濃度、活檢方式(開(kāi)放或穿刺)、手術(shù)方式(截肢或保肢)等因素作為變量,分析與骨肉瘤中Nestin的表達(dá)情況。腫瘤大小以影像學(xué)X線檢查所見(jiàn)為依據(jù),按照最大縱徑×最大橫徑(cm)表示。所有患者均行胸部CT及全身骨掃描排除肺部轉(zhuǎn)移灶及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。行保肢手術(shù)切除病灶腫瘤并進(jìn)行人工假體恢復(fù)重建。術(shù)后給予患者標(biāo)準(zhǔn)化療,獲取病理切片,經(jīng)病理科再次明確腫瘤的組織學(xué)類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)；同時(shí)根據(jù)臨床、影像和病理資料以及Enneking標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行腫瘤分期；術(shù)前術(shù)后組織比較評(píng)估化療反應(yīng)性(腫瘤細(xì)胞壞死率)。電話或約診患者進(jìn)行隨訪,了解腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,患者生存、死亡等情況。取骨肉瘤術(shù)前及術(shù)后有代表性的標(biāo)本進(jìn)行Nestin免疫組化染色,免疫組化結(jié)果采用histoscore法進(jìn)行評(píng)估。將30例骨肉瘤按中位數(shù)分為Nestin高表達(dá)組和Nestin低表達(dá)組,進(jìn)行分組比較。第二部分MG-63骨肉瘤細(xì)胞株中Nestin的表達(dá)研究對(duì)象：購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所骨肉瘤細(xì)胞株MG-63、A172(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)和成纖維細(xì)胞,由本實(shí)驗(yàn)室保存。方法：培養(yǎng)人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63細(xì)胞,將原代的骨肉瘤細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng),當(dāng)傳到第4代以后設(shè)為實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始實(shí)驗(yàn),同時(shí)以A172(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)腫瘤對(duì)照組和成纖維細(xì)胞為正常對(duì)照組,分別采用免疫熒光、Western blot、PCR技術(shù)檢測(cè)Nestin是否是骨肉瘤干細(xì)胞標(biāo)記物。結(jié)果第一部分Nestin在骨肉瘤組織中的表達(dá)及意義1、Nestin表達(dá)在骨肉瘤中histoscore為0.41～2.38(1.49±0.51),在80%(24/30)骨肉瘤標(biāo)本中,Nestin免疫組化呈典型陽(yáng)性染色,染色程度深,陽(yáng)性細(xì)胞比例高(histoscore 1.12-2.41);16.7%(5/30)骨肉瘤呈弱陽(yáng)性,細(xì)胞染色較淺,陽(yáng)性比例也較低(histoscore 0.61-0.91);另外1例骨肉瘤標(biāo)本中細(xì)胞陽(yáng)性染色極弱(histoscore=0.35)。規(guī)定histoscore0.5時(shí),組織染色為陰性,則96.7%(29/30)骨肉瘤為Nestin陽(yáng)性,而3.3%(1/30)為陰性。以中位數(shù)為分界,將30例骨肉瘤分為Nestin高表達(dá)組和低表達(dá)組,每組各15例。高表達(dá)組histoscore為1.71-2.45(1.98±0.22),低表達(dá)組histoscore為0.35～1.55(1.01±0.35)。2、單因素相關(guān)分析結(jié)果顯示,Nestin在骨肉瘤中的表達(dá)水平與化療反應(yīng)性、診斷時(shí)血清LDH升高、復(fù)發(fā)／轉(zhuǎn)移事件發(fā)生有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而與性別、年齡、腫瘤部位、瘤體大小、單發(fā)或多發(fā)、是否存在病理性骨折、初診時(shí)血清堿性磷酸酶濃度、活檢方式、手術(shù)方式等因素?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第二部分MG-63骨肉瘤細(xì)胞株中Nestin的表達(dá)免疫熒光結(jié)果顯示,Nestin在人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63細(xì)胞和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞都有較強(qiáng)的的熒光染色,但是在成纖維細(xì)胞中無(wú)表達(dá)；進(jìn)一步行Western blot實(shí)驗(yàn)和PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中蛋白質(zhì)和mRNA水平改變也相似,證明骨肉瘤細(xì)胞中存在Nestin的表達(dá)。[結(jié)論]：1、Nestin在骨肉瘤中呈高表達(dá)；骨肉瘤預(yù)后跟Nestin的表達(dá)水平呈正相關(guān)性,Nestin表達(dá)低預(yù)后較好,Nestin表達(dá)水平高預(yù)后差；Nestin表達(dá)水平可能影響骨肉瘤的化療結(jié)果,Nestin可能是導(dǎo)致骨肉瘤復(fù)發(fā)的因素之一。2、Nestin不僅可以在中樞神經(jīng)干細(xì)胞中表達(dá),而且在骨肉瘤干細(xì)胞中有也存在Nestin的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1184122