本文關(guān)鍵詞：利用DNA自組裝技術(shù)檢測DNA甲基化及腫瘤細胞

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【摘要】：建立腫瘤的早期準(zhǔn)確診斷策略及有效治療方法一直是科研工作者的奮斗目標(biāo)。本文利用自組裝技術(shù),首先合成了“頭碰頭”的金納米棒組裝體作為探針,再結(jié)合循環(huán)放大策略,構(gòu)建了一個表面等離子共振(SPR)信號放大檢測DNA甲基化的生物傳感器,實現(xiàn)了對DNA甲基化水平的靈敏檢測,并對甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dam MTase)的活性進行了準(zhǔn)確分析;其次利用DNA自組裝技術(shù)構(gòu)建了一種具備雙功能的DNA納米孔結(jié)構(gòu),可以作為特異性識別癌細胞并實現(xiàn)跨膜運輸?shù)挠行Чぞ摺嶒灲Y(jié)果顯示該DNA納米復(fù)合結(jié)構(gòu)能夠特異性地識別靶向腫瘤細胞并在較短時間內(nèi)成功刺破細胞膜,從而實現(xiàn)了直接殺死癌細胞的目的。主要內(nèi)容如下:1.設(shè)計了一個可以靈敏檢測DNA甲基化水平并分析Dam MTase活性的SPR生物傳感器:首先利用DNA的雜交,自組裝得到“頭碰頭”的金納米棒線性組裝體,將該高分子量的組裝體作為探針固定到芯片表面可以顯著增大SPR角的變化;再結(jié)合剪切聚合循環(huán)放大反應(yīng)實現(xiàn)SPR響應(yīng)信號的進一步增強,最終將這一傳感器用來對Dam MTase進行活性分析。該SPR生物傳感器在SPR角的變化量與Dam MTase的濃度(0.5-120U/mL)之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,檢測限可以達到0.2 U/mL。因為異常的DNA甲基化水平往往預(yù)示著癌癥等疾病的發(fā)生,所以該策略為癌癥的早期診斷提供了思路,在進一步應(yīng)用于早期臨床診斷方面也有著巨大的潛力。2.利用DNA自組裝技術(shù)合成了一種可以定向穿透細胞膜的雙功能DNA納米孔結(jié)構(gòu)并用來識別腫瘤細胞:首先運用DNA自組裝技術(shù)將六條DNA單鏈混合雜交得到DNA納米孔。因為該納米孔的一端修飾有生物素,所以可以利用生物素-親和素的相互作用,將生物素修飾的人B淋巴瘤細胞(Ramos)適體和穿膜肽序列(TAT)在親和素存在的情況下固定到DNA納米孔的端部,從而得到既能特異性識別靶細胞—Ramos細胞,又能高效穿透細胞膜的雙功能納米孔。因為有5-羧基熒光素(5-FAM)修飾的DNA參與了納米孔的構(gòu)建,所以可以應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡(CLSM)對該納米結(jié)構(gòu)與細胞孵育后的結(jié)果進行熒光成像分析。結(jié)果證明該納米結(jié)構(gòu)具有良好的選擇性和較高的穿膜效率,可以作為一種特異性識別腫瘤細胞的工具,具有很大的發(fā)展空間。
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1184000