本文關鍵詞：分子表型異質(zhì)與化療反應的關系和miR-424靶向調(diào)控CHK1參與乳腺癌進展的研究

  更多相關文章： 腫瘤異質(zhì)性 新輔助化療 分子標記物 乳腺癌 Chk1 乳腺癌 miR-424 細胞周期

【摘要】：乳腺癌是一組具有分子及生物學異質(zhì)性的腫瘤性疾病,腫瘤異質(zhì)性是困擾臨床治療的難題。ER、PR、HER2、Ki-67等分子標記物的檢測已經(jīng)成為乳腺癌患者臨床診療過程中的常規(guī)方法。分子標記物的變化,有助于分析腫瘤細胞對化療藥物的反應性,以及調(diào)整化療方案,指導用藥等。本次研究利用新輔助化療前后對照標本,檢測化療前后分子標記物的表達變化,并且探討了腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等臨床病理參數(shù)與化療前后分子表型改變的關聯(lián)。同時,我們還重點觀察了腫瘤異質(zhì)性克隆的化療反應性差別,探討HER2異質(zhì)性對化療反應的影響。方法1.收集山東大學齊魯醫(yī)院2011年-2013年之間107例接收至少3個周期新輔助化療的浸潤性乳腺癌標本,包括化療前粗針活檢和化療后手術(shù)切除腫瘤標本,完善病例的相關臨床病理資料。2.將107例浸潤性乳腺癌病例蠟塊分別切成4 μm薄片,免疫組化檢測新輔助化療前活檢標本和化療后手術(shù)切除腫瘤標本中ER、PR、HER2、Ki-67的表達情況。熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2基因擴增情況。3.ER和PR陽性表達參照H-score和ASCO/CAP指南(≥1%)兩種方法進行半定量和定性評判。HER2陽性判讀參照HercepTest標準。采用14%作為Ki-67陽性細胞數(shù)百分比的cut-off值。4.HER2基因異質(zhì)性判斷：2位病理醫(yī)師采用雙盲法,選取至少3個HER2基因有差別的腫瘤區(qū)域,每個區(qū)域計數(shù)至少20個腫瘤細胞,如果所有區(qū)域判讀結(jié)果一致,則認為沒有異質(zhì)性,否則,則判定為HER2異質(zhì)性。5.所有腫瘤根據(jù)活檢的受體表達情況和增值指數(shù)進行分子分型：luminalA亞型(ER+/PR+/HER2-, Ki6714%), luminalB亞型(ER+/PR+/HER2-, Ki67≥14%),HER2擴增亞型(ER-/PR-/HER2+),三陰性亞型(ER-/PR-/HER2),以及l(fā)uminal-HER2亞型(ER+/PR+/HER2+)。結(jié)果1.乳腺癌新輔助化療前后標本中,ER、PR、HER2化療后表達改變的發(fā)生率分別為14%(15/107,),24.3%(26/107)和4.7%(5/107)�；熀驪R(P=0.013)和Ki-67(P=0.000)的表達水平明顯下調(diào)。2.通過分析乳腺癌不同分子亞型化療前后分子標記物的表達變化發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌化療前后標記物ER、PR、HER2表達無變化, luminal B和luminal-HER2兩種亞型腫瘤出現(xiàn)較多分子表型改變。3.腫瘤體積大和腋窩淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的病例更容易出現(xiàn)化療后分子標記物表達的變化,提示乳腺癌在進展過程中有可能獲得更多的異質(zhì)性腫瘤細胞,從而導致化療前后表達的不一致。4.同一腫瘤內(nèi)部存在分子表型的異質(zhì)性,不同分子克隆的腫瘤細胞表現(xiàn)出對化療藥物不同的反應性。結(jié)論1.腫瘤異質(zhì)性是活檢標本和術(shù)后手術(shù)切除標本分子檢測結(jié)果不一致的原因之一。2. luminal B和luminal-HER2兩型腫瘤相對于其他類型的腫瘤表現(xiàn)出化療后更多的分子表型改變,提示有可能是異質(zhì)性更顯著的腫瘤類型。3.分子表型異質(zhì)性腫瘤細胞表現(xiàn)出對化療藥物不同的反應性,HER2擴增異質(zhì)性判讀標準急需進一步明確。Chkl (checkPoint kinasel,細胞周期檢測點激酶1)是細胞G2/M期重要的檢查點蛋白,在乳腺癌,尤其是三陰性乳腺癌中存在高水平表達,并與腫瘤放化療抵抗密切相關。我們前期研究發(fā)現(xiàn),同一腫瘤相對于新輔助化療前,Chk1蛋白表達在化療后顯著升高,并且與化療耐藥密切相關。同時,我們FISH研究發(fā)現(xiàn),CHK1基因并無擴增或多倍體情況。因此,我們推測轉(zhuǎn)錄后調(diào)控可能是Chk1蛋白過表達的原因。生物信息學預測miR-424可能靶向下調(diào)Chkl蛋白的表達。本研究首次探討在乳腺癌細胞系MDA-MB-231中,miR-424對CHK1的靶向調(diào)控作用,以及對細胞周期、細胞凋亡和遷移浸潤的影響。本研究將會為Chk1蛋白高表達引起的乳腺癌耐藥提供新的研究靶點。在未來的實驗中,我們將會進一步探討miR-424在提高腫瘤細胞化療敏感性中的靶點調(diào)控機制。方法1、熒光素酶實驗驗證CHK1是miR-424直接調(diào)控的靶基因。2、RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染后各組癌細胞中Chkl mRNA的表達情況；Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后各組癌細胞中Chkl蛋白的表達情況。3、采用實時定量熒光PCR技術(shù)檢測50例乳腺癌組織和15例癌旁組織中miR-424的表達情況。4、培養(yǎng)乳腺癌細胞系MDA-MB-231,瞬時轉(zhuǎn)染miR-424 mimic、miR-424 inhibitor及negative control,流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡變化。transwell檢測轉(zhuǎn)染后癌細胞的遷移和浸潤能力。結(jié)果1、熒光素酶實驗結(jié)果顯示,miR-424 mimic轉(zhuǎn)染組的熒光值較對照組明顯下調(diào)(P0.05),驗證了CHK1是miR-424的直接靶基因之一。2、RT-qPCR檢測結(jié)果顯示,miR-424mimic、miR-424inhibitor轉(zhuǎn)染組ChklmRNA的表達水平較NC組沒有明顯改變。Western Blot檢測結(jié)果顯示,miR-424mimic轉(zhuǎn)染組Chk1蛋白表達水平較NC組下調(diào),miR-424inhibitor轉(zhuǎn)染組Chkl蛋白表達水平較NC組升高,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、實時定量熒光PCR結(jié)果顯示,與15例癌旁組織比較,50例乳腺癌組織中miR-424表達水平下調(diào)接近50%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、流式細胞術(shù)檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)miR-424可以解除癌細胞G2／M期阻滯,miR-424過表達組細胞周期G2／M率(13.97%±0.81%)較對照組(20.33%±1.99%)顯著降低(P0.05,P=0.02) ；流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡表明,miR-424能誘導乳腺癌細胞的凋亡。miR-424 mimic轉(zhuǎn)染組的凋亡率(18.23±1.29%)較對照組(8.57±0.52%)升高了2.13倍(P0.05)；transwell檢測結(jié)果顯示,miR-424對乳腺癌細胞的遷移和浸潤能力有著明顯的抑制作用(P0.05)。結(jié)論1、CHK1是miR-424的直接靶基因之一。2、miR-424可通過調(diào)控基因CHK1表達解除乳腺癌細胞G2／M期阻滯,促進凋亡和抑制遷移浸潤。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關性研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預后[D];復旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關性研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：1183981