本文關(guān)鍵詞：分子表型異質(zhì)與化療反應(yīng)的關(guān)系和miR-424靶向調(diào)控CHK1參與乳腺癌進(jìn)展的研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤異質(zhì)性 新輔助化療 分子標(biāo)記物 乳腺癌 Chk1 乳腺癌 miR-424 細(xì)胞周期

【摘要】：乳腺癌是一組具有分子及生物學(xué)異質(zhì)性的腫瘤性疾病,腫瘤異質(zhì)性是困擾臨床治療的難題。ER、PR、HER2、Ki-67等分子標(biāo)記物的檢測已經(jīng)成為乳腺癌患者臨床診療過程中的常規(guī)方法。分子標(biāo)記物的變化,有助于分析腫瘤細(xì)胞對化療藥物的反應(yīng)性,以及調(diào)整化療方案,指導(dǎo)用藥等。本次研究利用新輔助化療前后對照標(biāo)本,檢測化療前后分子標(biāo)記物的表達(dá)變化,并且探討了腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等臨床病理參數(shù)與化療前后分子表型改變的關(guān)聯(lián)。同時,我們還重點(diǎn)觀察了腫瘤異質(zhì)性克隆的化療反應(yīng)性差別,探討HER2異質(zhì)性對化療反應(yīng)的影響。方法1.收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院2011年-2013年之間107例接收至少3個周期新輔助化療的浸潤性乳腺癌標(biāo)本,包括化療前粗針活檢和化療后手術(shù)切除腫瘤標(biāo)本,完善病例的相關(guān)臨床病理資料。2.將107例浸潤性乳腺癌病例蠟塊分別切成4 μm薄片,免疫組化檢測新輔助化療前活檢標(biāo)本和化療后手術(shù)切除腫瘤標(biāo)本中ER、PR、HER2、Ki-67的表達(dá)情況。熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2基因擴(kuò)增情況。3.ER和PR陽性表達(dá)參照H-score和ASCO/CAP指南(≥1%)兩種方法進(jìn)行半定量和定性評判。HER2陽性判讀參照HercepTest標(biāo)準(zhǔn)。采用14%作為Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)百分比的cut-off值。4.HER2基因異質(zhì)性判斷：2位病理醫(yī)師采用雙盲法,選取至少3個HER2基因有差別的腫瘤區(qū)域,每個區(qū)域計數(shù)至少20個腫瘤細(xì)胞,如果所有區(qū)域判讀結(jié)果一致,則認(rèn)為沒有異質(zhì)性,否則,則判定為HER2異質(zhì)性。5.所有腫瘤根據(jù)活檢的受體表達(dá)情況和增值指數(shù)進(jìn)行分子分型：luminalA亞型(ER+/PR+/HER2-, Ki6714%), luminalB亞型(ER+/PR+/HER2-, Ki67≥14%),HER2擴(kuò)增亞型(ER-/PR-/HER2+),三陰性亞型(ER-/PR-/HER2),以及l(fā)uminal-HER2亞型(ER+/PR+/HER2+)。結(jié)果1.乳腺癌新輔助化療前后標(biāo)本中,ER、PR、HER2化療后表達(dá)改變的發(fā)生率分別為14%(15/107,),24.3%(26/107)和4.7%(5/107)�；熀驪R(P=0.013)和Ki-67(P=0.000)的表達(dá)水平明顯下調(diào)。2.通過分析乳腺癌不同分子亞型化療前后分子標(biāo)記物的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌化療前后標(biāo)記物ER、PR、HER2表達(dá)無變化, luminal B和luminal-HER2兩種亞型腫瘤出現(xiàn)較多分子表型改變。3.腫瘤體積大和腋窩淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的病例更容易出現(xiàn)化療后分子標(biāo)記物表達(dá)的變化,提示乳腺癌在進(jìn)展過程中有可能獲得更多的異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞,從而導(dǎo)致化療前后表達(dá)的不一致。4.同一腫瘤內(nèi)部存在分子表型的異質(zhì)性,不同分子克隆的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出對化療藥物不同的反應(yīng)性。結(jié)論1.腫瘤異質(zhì)性是活檢標(biāo)本和術(shù)后手術(shù)切除標(biāo)本分子檢測結(jié)果不一致的原因之一。2. luminal B和luminal-HER2兩型腫瘤相對于其他類型的腫瘤表現(xiàn)出化療后更多的分子表型改變,提示有可能是異質(zhì)性更顯著的腫瘤類型。3.分子表型異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出對化療藥物不同的反應(yīng)性,HER2擴(kuò)增異質(zhì)性判讀標(biāo)準(zhǔn)急需進(jìn)一步明確。Chkl (checkPoint kinasel,細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶1)是細(xì)胞G2/M期重要的檢查點(diǎn)蛋白,在乳腺癌,尤其是三陰性乳腺癌中存在高水平表達(dá),并與腫瘤放化療抵抗密切相關(guān)。我們前期研究發(fā)現(xiàn),同一腫瘤相對于新輔助化療前,Chk1蛋白表達(dá)在化療后顯著升高,并且與化療耐藥密切相關(guān)。同時,我們FISH研究發(fā)現(xiàn),CHK1基因并無擴(kuò)增或多倍體情況。因此,我們推測轉(zhuǎn)錄后調(diào)控可能是Chk1蛋白過表達(dá)的原因。生物信息學(xué)預(yù)測miR-424可能靶向下調(diào)Chkl蛋白的表達(dá)。本研究首次探討在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中,miR-424對CHK1的靶向調(diào)控作用,以及對細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和遷移浸潤的影響。本研究將會為Chk1蛋白高表達(dá)引起的乳腺癌耐藥提供新的研究靶點(diǎn)。在未來的實驗中,我們將會進(jìn)一步探討miR-424在提高腫瘤細(xì)胞化療敏感性中的靶點(diǎn)調(diào)控機(jī)制。方法1、熒光素酶實驗驗證CHK1是miR-424直接調(diào)控的靶基因。2、RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染后各組癌細(xì)胞中Chkl mRNA的表達(dá)情況；Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后各組癌細(xì)胞中Chkl蛋白的表達(dá)情況。3、采用實時定量熒光PCR技術(shù)檢測50例乳腺癌組織和15例癌旁組織中miR-424的表達(dá)情況。4、培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,瞬時轉(zhuǎn)染miR-424 mimic、miR-424 inhibitor及negative control,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化。transwell檢測轉(zhuǎn)染后癌細(xì)胞的遷移和浸潤能力。結(jié)果1、熒光素酶實驗結(jié)果顯示,miR-424 mimic轉(zhuǎn)染組的熒光值較對照組明顯下調(diào)(P0.05),驗證了CHK1是miR-424的直接靶基因之一。2、RT-qPCR檢測結(jié)果顯示,miR-424mimic、miR-424inhibitor轉(zhuǎn)染組ChklmRNA的表達(dá)水平較NC組沒有明顯改變。Western Blot檢測結(jié)果顯示,miR-424mimic轉(zhuǎn)染組Chk1蛋白表達(dá)水平較NC組下調(diào),miR-424inhibitor轉(zhuǎn)染組Chkl蛋白表達(dá)水平較NC組升高,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、實時定量熒光PCR結(jié)果顯示,與15例癌旁組織比較,50例乳腺癌組織中miR-424表達(dá)水平下調(diào)接近50%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)miR-424可以解除癌細(xì)胞G2／M期阻滯,miR-424過表達(dá)組細(xì)胞周期G2／M率(13.97%±0.81%)較對照組(20.33%±1.99%)顯著降低(P0.05,P=0.02) ；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡表明,miR-424能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的凋亡。miR-424 mimic轉(zhuǎn)染組的凋亡率(18.23±1.29%)較對照組(8.57±0.52%)升高了2.13倍(P0.05)；transwell檢測結(jié)果顯示,miR-424對乳腺癌細(xì)胞的遷移和浸潤能力有著明顯的抑制作用(P0.05)。結(jié)論1、CHK1是miR-424的直接靶基因之一。2、miR-424可通過調(diào)控基因CHK1表達(dá)解除乳腺癌細(xì)胞G2／M期阻滯,促進(jìn)凋亡和抑制遷移浸潤。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙酰化酶抑制劑對乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：1183981