本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)脂蛋白FABP4在膽管癌能量代謝及腫瘤轉(zhuǎn)移中的生物學(xué)作用及機(jī)制初步研究

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【摘要】：目的:初步研究轉(zhuǎn)脂蛋白(Fatty acid-binding protein 4,FABP4)在脂肪組織影響人膽管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中的生物學(xué)作用以及可能的調(diào)控機(jī)制。方法:無菌條件下獲取小鼠脂肪組織及乳腺癌患者脂肪組織,制成脂肪組織浸出液,分別與人類膽管癌細(xì)胞系RBE、Hcccp810進(jìn)行共培養(yǎng)。測定共培養(yǎng)前后細(xì)胞培養(yǎng)基中甘油和脂肪酸含量的變化,采用侵襲和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測脂肪組織對人膽管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,并經(jīng)Western blot方法檢測共培養(yǎng)后膽管癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9、TGF-β1表達(dá)的變化。采用脂肪特異熒光染料Bodipy研究脂肪組織共培養(yǎng)對腫瘤細(xì)胞內(nèi)脂肪聚集的影響,研究FABP4基因在其中所起的作用,并采用Western blot方法檢測脂肪共培養(yǎng)后腫瘤細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白含量的變化,以及FABP4基因?qū)MT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。此外,采用FABP4腺病毒載體感染膽管癌細(xì)胞RBE后,經(jīng)尾靜脈注射入裸鼠以制備膽管癌轉(zhuǎn)移模型。應(yīng)用小動(dòng)物成像系統(tǒng)觀察各組腫瘤細(xì)胞在各種內(nèi)臟中分布和聚集情況,經(jīng)HE染色檢測小鼠肝臟和肺中實(shí)體瘤的形成情況,并通過免疫組化檢測小鼠肝臟和肺增殖指標(biāo)Ki67表達(dá)水平的變化,從而在動(dòng)物體內(nèi)研究FABP4基因?qū)χ緟⑴c膽管癌轉(zhuǎn)移調(diào)控的作用。結(jié)果:小鼠和人的脂肪組織均能促進(jìn)人膽管癌細(xì)胞的侵襲和遷移。脂肪浸出液中甘油和脂肪酸含量都明顯升高(P0.05),與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)基中脂肪酸含量明顯降低(P0.05)而甘油含量幾乎不變,且脂肪組織與膽管癌細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)的MMP-9和TGF-β1的表達(dá)升高。脂肪組織與膽管癌細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)脂肪聚集增多,FABP4基因不僅促進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)脂肪聚集,還促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。脂肪組織與膽管癌細(xì)胞共培養(yǎng)后侵襲相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9表達(dá)增高,EMT相關(guān)蛋白Claudin1、Occludin、E-cadherin和β-catenin表達(dá)下降SNAIL表達(dá)增加,Smad3無明顯變化,表明腫瘤細(xì)胞間緊密連接作用減弱并向基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,即發(fā)生了EMT,抑制FABP4基因功能會抑制EMT發(fā)生,而過表達(dá)FABP4會促進(jìn)EMT的發(fā)生。尾靜脈注射后24小時(shí),經(jīng)小動(dòng)物成像發(fā)現(xiàn)脂肪會促進(jìn)膽管癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的轉(zhuǎn)移和在臟器內(nèi)的聚集,脂肪共培養(yǎng)組小鼠肝臟和腎臟熒光強(qiáng)度分別比對照組高出28.8%和11.5%(P0.05),FABP4基因高表達(dá)對這一現(xiàn)象有促進(jìn)作用,FABP4過表達(dá)組小鼠肝臟、心臟、腎臟熒光強(qiáng)度比NC組分別高出26.4%、7.3%和22.3%(P0.05)。尾靜脈注射30天后,HE染色檢測到脂肪共培養(yǎng)組中小鼠肝臟組織中形成實(shí)體瘤,免疫組化顯示脂肪共培養(yǎng)組和FABP4過表達(dá)組小鼠肝臟和肺組織中Ki67表達(dá)水平較高,而FABP4在兩種組織中均無特異表達(dá)。結(jié)論:體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脂肪組織可促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力,其在膽管癌細(xì)胞內(nèi)聚集也呈增強(qiáng)趨勢,FABP4基因高表達(dá)可進(jìn)一步增加脂肪在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的聚集,以及腫瘤細(xì)胞的體外侵襲集遷移能力。其中涉及的機(jī)制可能與FABP4介導(dǎo)的脂肪引起的癌細(xì)胞EMT有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8

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