本文關(guān)鍵詞：小白菊內(nèi)酯干預(yù)Jurkat細(xì)胞粘附骨髓基質(zhì)細(xì)胞的作用及機(jī)制

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【摘要】：目的:通過(guò)體外模擬骨髓微環(huán)境,觀察急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)對(duì)Jurkat細(xì)胞的粘附作用及小白菊內(nèi)酯(PTL)對(duì)此粘附作用的干預(yù)效果,并探討其可能的作用機(jī)制。方法:采集2013年10月-2014年3月于桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院經(jīng)FAB分型及MICM分型確診為急性淋巴細(xì)胞白血病并經(jīng)治療后緩解的6例患者髂后上棘骨髓液,體外分離培養(yǎng)BMSCs。Jurkat細(xì)胞復(fù)蘇后傳代培養(yǎng),取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),建立BMSCs與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)模型。設(shè)置Jurkat細(xì)胞組、BMSCs組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 4μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 8μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 12μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL 16μmol/L組。通過(guò)MTT法分別檢測(cè)加入PTL前、后兩者共培養(yǎng)24h、48h的粘附率,觀察BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的粘附作用及PTL的干預(yù)效果;通過(guò)ELISA法測(cè)定PTL干預(yù)前、后兩者共培養(yǎng)上清液中可溶性血管細(xì)胞粘附分子-1(sVCAM-1)的表達(dá);采用RT-PCR法檢測(cè)PTL干預(yù)前、后共培養(yǎng)模型中BMSCs VCAM-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:MTT法結(jié)果顯示,藥物作用24h后,對(duì)照組和PTL各濃度組(4μmol/L,8μmol/L,12μmol/L,16μmol/L)的粘附率分別為59.64%±4.32%、39.10%±3.80%、28.52%±4.74%、21.01%±3.55%、13.92%±1.88%,對(duì)照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=133.21,P0.01),各濃度組之間比較均P0.01;隨著作用時(shí)間延長(zhǎng),48h后對(duì)照組和PTL各濃度組的粘附率分別為67.37%±5.02%、30.21%±0.49%、22.43%±1.76%、14.71%±0.65%、8.00%±1.19%,對(duì)照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=533.70,P0.01),各濃度組之間比較均P0.01。ELISA法結(jié)果顯示藥物作用24h后PTL各濃度組共培養(yǎng)上清液中sVCAM-1濃度顯著低于對(duì)照組(F=545.56,P0.01),PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs分泌sVCAM-1(R=-0.99,P0.01),PTL16μmol/L組上清液中sVCAM-1濃度基本降至單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs組水平,兩組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示PTL各濃度組BMSCs VCAM-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(F=7006.15,P0.01),PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)(R=-0.99,P0.01),PTL16μmol/L組VCAM-1 mRNA表達(dá)基本降至單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs組水平,兩組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與ELISA結(jié)果相一致。結(jié)論:小白菊內(nèi)酯在體外呈劑量依賴性抑制BMSCs對(duì)Jurkat細(xì)胞的粘附,其作用機(jī)制可能與抑制BMSCs VCAM-1的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71

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本文編號(hào)：1165540