本文關鍵詞：小白菊內酯干預Jurkat細胞粘附骨髓基質細胞的作用及機制

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【摘要】：目的:通過體外模擬骨髓微環(huán)境,觀察急性淋巴細胞白血病(ALL)患者骨髓基質細胞(BMSCs)對Jurkat細胞的粘附作用及小白菊內酯(PTL)對此粘附作用的干預效果,并探討其可能的作用機制。方法:采集2013年10月-2014年3月于桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院經(jīng)FAB分型及MICM分型確診為急性淋巴細胞白血病并經(jīng)治療后緩解的6例患者髂后上棘骨髓液,體外分離培養(yǎng)BMSCs。Jurkat細胞復蘇后傳代培養(yǎng),取生長狀態(tài)良好的細胞用于實驗,建立BMSCs與Jurkat細胞共培養(yǎng)模型。設置Jurkat細胞組、BMSCs組、BMSCs+Jurkat細胞組、BMSCs+Jurkat細胞+PTL 4μmol/L組、BMSCs+Jurkat細胞+PTL 8μmol/L組、BMSCs+Jurkat細胞+PTL 12μmol/L組、BMSCs+Jurkat細胞+PTL 16μmol/L組。通過MTT法分別檢測加入PTL前、后兩者共培養(yǎng)24h、48h的粘附率,觀察BMSCs對Jurkat細胞的粘附作用及PTL的干預效果;通過ELISA法測定PTL干預前、后兩者共培養(yǎng)上清液中可溶性血管細胞粘附分子-1(sVCAM-1)的表達;采用RT-PCR法檢測PTL干預前、后共培養(yǎng)模型中BMSCs VCAM-1 mRNA的相對表達量。結果:MTT法結果顯示,藥物作用24h后,對照組和PTL各濃度組(4μmol/L,8μmol/L,12μmol/L,16μmol/L)的粘附率分別為59.64%±4.32%、39.10%±3.80%、28.52%±4.74%、21.01%±3.55%、13.92%±1.88%,對照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計學意義(F=133.21,P0.01),各濃度組之間比較均P0.01;隨著作用時間延長,48h后對照組和PTL各濃度組的粘附率分別為67.37%±5.02%、30.21%±0.49%、22.43%±1.76%、14.71%±0.65%、8.00%±1.19%,對照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計學意義(F=533.70,P0.01),各濃度組之間比較均P0.01。ELISA法結果顯示藥物作用24h后PTL各濃度組共培養(yǎng)上清液中sVCAM-1濃度顯著低于對照組(F=545.56,P0.01),PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs分泌sVCAM-1(R=-0.99,P0.01),PTL16μmol/L組上清液中sVCAM-1濃度基本降至單獨培養(yǎng)的BMSCs組水平,兩組之間差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR結果顯示PTL各濃度組BMSCs VCAM-1 mRNA相對表達量顯著低于對照組(F=7006.15,P0.01),PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs VCAM-1 mRNA表達(R=-0.99,P0.01),PTL16μmol/L組VCAM-1 mRNA表達基本降至單獨培養(yǎng)的BMSCs組水平,兩組之間差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05),與ELISA結果相一致。結論:小白菊內酯在體外呈劑量依賴性抑制BMSCs對Jurkat細胞的粘附,其作用機制可能與抑制BMSCs VCAM-1的表達有關。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71

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