本文關鍵詞：miR-18a在電離輻射誘導結腸癌細胞死亡中作用的研究

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【摘要】：結腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，全世界每年約有一百萬新增病例。腫瘤治療方式包括手術、化療、放療、激素治療等。其中放射治療在腫瘤治療中發(fā)揮著重要作用。但由于個體間存在差異，對放療的敏感性不同，所以治療效果差強人意。因此，如何提高腫瘤的放射敏感性，成為當前結腸癌治療的關鍵問題之一。 miRNAs是一類長度18~25個核酸的非編碼RNA，能與靶基因的3’UTR結合，，發(fā)揮上調或下調靶基因的作用。諸多研究證實miR-18a在胃癌、肝癌、結直腸癌等多種腫瘤中高表達，提示miR-18a在腫瘤中發(fā)揮重要作用。但是miR-18a在電離輻射誘導結腸癌細胞死亡中作用及其機制還鮮有報道。 目的： 闡述miR-18a在電離輻射（IR）誘導結腸癌細胞死亡中的作用，并深入探討miR-18a影響結腸癌細胞輻射敏感性的可能機制，為指導臨床結腸癌治療方案的優(yōu)化以及新治療靶點的探索提供理論依據(jù)。 方法： （1）選用人結腸癌細胞SW116和SW480為研究對象；（2）qRT-PCR法檢測細胞內miR-18a的表達情況；（3）Western Blot法檢測蛋白水平變化；（4）集落形成實驗檢測細胞輻射敏感性；（5）流式細胞術檢測細胞周期、凋亡率和自噬率；（6）Quantity One軟件對蛋白電泳條帶進行灰度分析。 結果： 1.miR-18a對電離輻射誘導SW480細胞死亡、細胞周期、凋亡和自噬的影響 （1）miR-18a對電離輻射誘導的SW480細胞死亡的影響 集落形成實驗表明，與NC組比較，mimic組照射后細胞存活分數(shù)明顯增加（P 0.05）；與NCi組比較，inhibitor組細胞存活分數(shù)變化不明顯。提示過表達miR-18a能減少電離輻射誘導的細胞死亡。 （2）miR-18a對電離輻射誘導的SW480細胞周期的影響 NC+4Gy組G2/M期細胞百分率明顯高于NC組（P 0.05），mimic+4Gy組G2/M期細胞百分率明顯低于mimic組（P 0.05），反轉了這一情況。提示過表達miR-18a可以抑制電離輻射誘導的G2/M期阻滯。 （3）miR-18a對電離輻射誘導的SW480細胞凋亡的影響 NC+4Gy組細胞凋亡率比NC組增加了1.26%，mimic+4Gy組細胞凋亡率比mimic組增加了0.38%。與NCi組比較，inhibitor組細胞凋亡率變化不明顯。提示過表達miR-18a可以抑制電離輻射誘導的SW480細胞凋亡。 （4）miR-18a對電離輻射誘導的SW480細胞自噬的影響 與NC組比較，mimic組細胞自噬率略有增加；聯(lián)合照射后，mimic+4Gy組細胞自噬率明顯低于NC+4Gy組（P 0.05）。與NCi組比較，inhibitor組細胞自噬率略有增加；聯(lián)合照射后，inhibitor+4Gy組細胞自噬率比NCi+4Gy組明顯增加（P 0.05）。提示過表達miR-18a可以抑制電離輻射誘導的SW480細胞自噬。 2.miR-18a對電離輻射誘導SW116細胞死亡、細胞周期、凋亡和自噬的影響 （1）miR-18a對電離輻射誘導SW116細胞死亡的影響集落形成實驗表明，與NC組比較，mimic組照射后細胞存活分數(shù)明顯降低（P 0.05），提示過表達miR-18a能增加電離輻射誘導的SW116細胞死亡。 （2）miR-18a對電離輻射誘導的SW116細胞周期的影響 NC+4Gy組G2/M期細胞百分率比NC組增加了4.25%，mimic+4Gy組G2/M期細胞百分率比mimic組增加8.71%。提示過表達miR-18a可以增加電離輻射誘導的SW116細胞G2/M期阻滯。 （3）miR-18a對電離輻射誘導SW116細胞凋亡的影響 與NC組比較，mimic組細胞凋亡率明顯增加（P 0.05）；聯(lián)合照射后，mimic+4Gy組細胞凋亡率明顯高于NC+4Gy組（P 0.05）。提示過表達miR-18a可以促進SW116細胞凋亡。 （4）miR-18a對電離輻射誘導SW116細胞自噬的影響 NC+4Gy組細胞自噬率比NC組增加了3.64%，mimic+4Gy組細胞自噬率比mimic組增加了7.67%。提示過表達miR-18a可以促進電離輻射誘導的細胞自噬。 3.miR-18a在兩種結腸癌細胞中調控ATM的表達 （1）SW480細胞中miR-18a上調ATM表達 蛋白電泳結果顯示，mimic組ATM蛋白表達水平略高于NC組，并且mimic+4Gy組ATM蛋白表達水平高于NC+4Gy組。提示過表達miR-18a可以上調SW480細胞中ATM表達。 （2）SW116細胞中miR-18a抑制ATM的表達 蛋白電泳結果顯示，mimic組ATM蛋白表達水平低于NC組，并且mimic+4Gy組ATM蛋白表達水平低于NC+4Gy組。提示過表達miR-18a可以下調SW116細胞中ATM表達。 結論： 1.過表達miR-18a可以降低SW480細胞的輻射敏感性，抑制G2/M期阻滯；過表達miR-18a可以增加SW116細胞的輻射敏感性，增加G2/M期阻滯。 2.miR-18a在結腸癌細胞SW480和SW116中對自噬發(fā)揮著不同的調控作用。在SW480細胞中miR-18a抑制電離輻射誘導的自噬，而在SW116細胞中促進電離輻射誘導的自噬。 3.在SW480細胞中miR-18a抑制電離輻射誘導的凋亡。 4.在SW480細胞中miR-18a上調ATM的表達，而在SW116細胞中miR-18a抑制ATM的表達。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Molecular mechanism and regulation of autophagy[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年12期

本文編號：1163630