本文關(guān)鍵詞：耐藥性肺腺癌A549細胞能量代謝的初步研究

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【摘要】：研究目的1闡明耐藥性肺腺癌A549細胞的能量代謝狀態(tài)和主要產(chǎn)能途徑。2探究靶向上述產(chǎn)能途徑對化療藥物抗腫瘤效果的影響。研究方法1建立肺腺癌耐藥細胞系1.1利用順鉑濃度遞增的方法,誘導(dǎo)親本肺腺癌細胞A549建立人耐藥性肺腺癌細胞系A(chǔ)549/CR(cisplatin-resistant A549);1.2利用MTS實驗驗證A549/CR的耐藥性。2耐藥性肺腺癌A549細胞的能量代謝狀態(tài)和主要依賴的產(chǎn)能途徑2.1采用Cell Titer-Glo?發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒,檢測A549與A549/CR細胞的ATP含量,了解耐藥性肺腺癌A549細胞的能量狀態(tài);2.2利用熒光標記的葡萄糖類似物2-NBDG,比較A549與A549/CR細胞的葡萄糖攝取能力,反映耐藥性肺腺癌A549細胞的葡萄糖代謝狀態(tài);2.3采用乳酸測定試劑盒,檢測A549與A549/CR細胞的乳酸生成量,了解糖酵解的活化程度;2.4在下述不同條件下(1)單獨用糖酵解抑制劑2-DG處理,(2)單獨用氧化磷酸化抑制劑寡霉素處理,(3)聯(lián)合應(yīng)用2-DG和寡霉素處理,利用Cell Titer-Glo?發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒,觀察A549與A549/CR細胞ATP含量變化,反映兩群細胞對糖酵解和氧化磷酸化的依賴程度。3代謝抑制劑對耐藥細胞生存的影響3.1利用MTS實驗分別檢測濃度為0μmol/m L、10μmol/m L和20μmol/m L的2-DG對A549/CR細胞生存的影響;3.2聯(lián)合應(yīng)用不同濃度組合的2-DG和順鉑處理A549/CR細胞,利用MTS實驗檢測A549/CR細胞活力,反映耐藥細胞對順鉑的敏感性變化。結(jié)果1成功建立了肺腺癌耐藥細胞系A(chǔ)549/CR1.1順鉑連續(xù)處理三個月后,A549/CR細胞可在較高濃度(5μg/m L)順鉑的培養(yǎng)基中維持生長;1.2 MTS實驗結(jié)果顯示當順鉑濃度為40μg/m L時,A549/CR細胞的存活率比A549細胞高出約10%,差異有統(tǒng)計學意義(n=4,P0.001)。2耐藥性肺腺癌A549細胞的能量水平較高,主要依賴糖酵解產(chǎn)生能量2.1 A549/CR細胞的ATP含量顯著升高,約為A549細胞的1.8倍(n=4,P0.001);2.2葡萄糖攝取結(jié)果顯示A549/CR細胞的熒光強度顯著高于A549細胞(n=4,P0.05),說明其攝取了更多的熒光標記的2-NBDG;2.3乳酸生成量結(jié)果顯示A549/CR細胞的乳酸生成量顯著升高,約為A549細胞的1.6倍(n=4,P0.001);2.4代謝抑制劑對ATP水平的影響如下:(1)單獨應(yīng)用2-DG處理細胞時,A549/CR細胞ATP含量下降了85%(n=3,P0.001),說明其與A549相比對2-DG的敏感性更高,(2)單獨應(yīng)用寡霉素處理細胞時,A549細胞的ATP水平下降了40%,(n=3,P0.001),而A549/CR細胞僅下降不到10%;(3)聯(lián)合應(yīng)用2-DG與寡霉素處理細胞時,A549/CR和A549細胞ATP含量的變化趨勢與單獨應(yīng)用2-DG時幾乎相同,說明耐藥性肺腺癌A549細胞更依賴糖酵解,而幾乎不依賴氧化磷酸化。3代謝抑制劑對耐藥細胞生存的影響3.1通過MTS實驗可知低濃度(20μmol/m L以下)的2-DG對耐藥細胞的增殖無明顯影響(n=4,P0.05);3.2聯(lián)合用藥結(jié)果顯示較低濃度(10μmol/mL)的2-DG與10μg/mL順鉑聯(lián)用可使耐藥細胞的死亡率增加80%(n=3,P0.01)。結(jié)論1耐藥性肺腺癌A549細胞具有更高的ATP水平。2耐藥性肺腺癌A549細胞主要依賴糖酵解產(chǎn)生能量。3糖酵解抑制劑可使耐藥性肺腺癌A549細胞恢復(fù)對順鉑的敏感性。綜上所述,能量水平較高的耐藥性肺腺癌A549細胞主要依賴糖酵解產(chǎn)生能量,靶向抑制糖酵解可增強順鉑的抗腫瘤效應(yīng)。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
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本文編號：1161838