本文關(guān)鍵詞：雙氫青蒿素對頭頸部鱗癌細(xì)胞增殖抑制作用及化療藥物敏感性影響的研究

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【摘要】：目的:研究雙氫青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)對喉癌細(xì)胞Hep-2及舌癌細(xì)胞Cal-27增殖抑制作用的影響,初步研究DHA聯(lián)合順鉑(Cisplatin,DDP)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以及紫杉醇(Paclitaxel,PTX)對Hep-2及Cal-27細(xì)胞增殖抑制作用的影響,探究DHA是否可通過作用于Stat3通路影響化療藥物的作用,尋求腫瘤聯(lián)合化療的新策略。方法:1體外培養(yǎng)喉癌細(xì)胞Hep-2、舌癌細(xì)胞Cal-27,使用不同濃度的DHA(0、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM、320μM)分別作用24h、36h、48h,使用MTT法對細(xì)胞增殖情況進(jìn)行檢測。2使用不同濃度的DDP(0、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml)、5-FU(0、4μg/ml、20μg/ml、100μg/ml)、PTX(0、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml)或其與10μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用,分別作用于Hep-2細(xì)胞及Cal-27細(xì)胞24h、48h,使用MTT法對細(xì)胞增殖情況進(jìn)行檢測。3使用DDP(1μg/ml)、5-FU(20μg/ml)、PTX(10 ng/ml)或其與10μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用,作用于Hep-2細(xì)胞及Cal-27細(xì)胞24h、48h后,使用Western blot法檢測蛋白Stat3,p-Stat3及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl的表達(dá)情況。結(jié)果:1.1不同濃度的DHA對喉癌細(xì)胞Hep-2增殖均有抑制作用,使用析因方差分析顯示,其抑制作用呈時間(Ft=4.945,P=0.030.05)、劑量(Fc=42.715,P=0.000.01)依賴性。DHA作用于人喉癌細(xì)胞Hep-2在24小時、36小時、48小時使用,使用Compu Syn軟件計算IC50結(jié)果為:105.972μM、61.096μM、58.179μM。1.2不同濃度的DHA處理舌癌Cal-27細(xì)胞不同時間,所得結(jié)果顯示,其抑制作用呈時間(Ft=58.476,P=0.000.01)、劑量(Fc=450.735,P=0.000.01)依賴性。DHA作用于人舌癌細(xì)胞Cal-27在24小時、36小時、48小時的IC50結(jié)果分別為:103.234μM、61.729μM、52.676μM。2.1 DHA與常用化療藥物聯(lián)合應(yīng)用對喉癌Hep-2細(xì)胞增殖的影響。使用MTT法測細(xì)胞生存率,析因方差分析各組間的差異,使用Com Pusyn軟件繪制24小時及48小時兩藥物的等效線。(1)DDP作用于Hep-2細(xì)胞,對Hep-2細(xì)胞的抑制呈時間(Ft=26.141,P=0.000.01)、劑量(Fc=95.983,P=0.000.01)依賴性。10μM的DHA與不同濃度的DDP聯(lián)合應(yīng)用作用24小時、48小時均呈協(xié)同作用。(2)體外培養(yǎng)Hep-2細(xì)胞,不同濃度的5-FU作用24小時、48小時,對于細(xì)胞的抑制作用呈時間(Ft=422.750,P=0.000.01)、劑量(Fc=39.988,P=0.000.01)依賴性。等效線法分析顯示:在24小時、48小時,不同濃度的5-FU與10μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用,均呈協(xié)同作用。(3)PTX作用于Hep-2細(xì)胞,對細(xì)胞的抑制呈時間(Ft=245.324,P=0.000.01)、劑量(Fc=195.628,P=0.000.01)依賴性。等效線法分析結(jié)果顯示:兩藥聯(lián)合作用呈協(xié)同作用。2.2 DHA與常用化療藥物聯(lián)合應(yīng)用對舌癌Cal-27細(xì)胞的影響。(1)DDP及DDP聯(lián)合10μM的DHA對Cal-27細(xì)胞均有抑制作用。呈時間(Ft=22.395,P=0.000.01)、劑量(Fc=71.572,P=0.000.01)依賴性。10μM的DHA與不同濃度的DDP聯(lián)合應(yīng)用,在24小時及48小時各濃度均呈協(xié)同作用。(2)5-FU及5-FU與DHA聯(lián)合組作用,對細(xì)胞增殖的抑制呈時間(Ft=1893.202,P=0.000.01)、劑量依賴性(Fc=1865.411,P=0.000.01)。藥物處理24小時、48h后,5-FU各濃度與DHA均呈協(xié)同作用。(3)PTX對細(xì)胞作用呈時間(Ft=478.170,P=0.000.01)、劑量依賴性(Fc=547.807,P=0.000.01)。等效線圖解法結(jié)果顯示:PTX各濃度與DHA聯(lián)合作用在24小時及48小時均呈協(xié)同作用。3 Western blot檢測DHA與DDP、5-FU、PTX聯(lián)合應(yīng)用于Hep-2及Cal-27細(xì)胞后,Stat3、p-Stat3及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl表達(dá)水平的變化,使用單因素方差對結(jié)果進(jìn)行分析。其中各組Stat3表達(dá)均無差別(P0.05),對于p-Stat3、Bcl-xl的表達(dá)進(jìn)行分析。(1)DDP與DHA聯(lián)用組與單藥組相比,p-Stat3(P=0.000.01)、Bcl-xl(P=0.000.01)的表達(dá)明顯減少。DHA可能通過影響Stat3通路影響增加DDP對Hep-2、Cal-27細(xì)胞的敏感性。(2)Hep-2及Cal-27細(xì)胞在給予DHA聯(lián)合5-FU處理后與單藥組相比,p-Stat3(P=0.000.01)及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl(P=0.000.01)明顯減少�？梢奃HA能夠通過影響Stat3通路影響5-FU對兩細(xì)胞的抑制作用。(3)PTX聯(lián)合DHA作用于Hep-2細(xì)胞及Cal-27細(xì)胞。PTX單藥組及DHA聯(lián)合PTX組p-Stat3表達(dá)均升高,且聯(lián)合組增高更明顯。DHA與PTX聯(lián)用對細(xì)胞增殖的抑制可能并非通過影響Stat3通路作用。檢測其下游凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl表達(dá),顯示聯(lián)合組Bcl-xl的表達(dá)較單藥組降低。結(jié)論:1 DHA對喉癌細(xì)胞Hep-2、舌癌細(xì)胞Cal-27細(xì)胞的增殖具有抑制作用。2體外培養(yǎng)喉癌細(xì)胞Hep-2、舌癌Cal-27細(xì)胞,DHA能夠增強(qiáng)DDP、5-FU、PTX的化療敏感性。3 DHA對DDP、5-FU、PTX的增敏作用至少部分通過Stat3通路作用,而其對于PTX的增敏作用可能并非通過Stat3通路作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.91

【參考文獻(xiàn)】

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1 張祖貽;余世慶;苗立云;黃曉英;張曉萍;朱玉萍;夏小紅;李丹奇;;青蒿琥酯聯(lián)合NP方案治療中晚期非小細(xì)胞肺癌的隨機(jī)對照研究[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報;2008年02期

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本文編號：1152682