本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的調(diào)控作用及機(jī)制的體外研究

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【摘要】：目的:探討體外人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)增殖和遷移的作用及其分子機(jī)制。方法:采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)hUC-MSCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)hUC-MSCs表面標(biāo)志物CD19、CD29、CD90和CD105,茜素紅和油紅O染色分別鑒定細(xì)胞的成骨、成脂分化潛能。收集并配制不同濃度hUC-MSCs條件培養(yǎng)基(hUC-MSCs conditioned medium,hUC-MSCs-CM),細(xì)胞計(jì)數(shù)法和細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(cell counting kit 8,CCK-8)檢測(cè)hUC-MSCs-CM及重組人白介素6(recombinant human interleukin 6,rh IL-6)對(duì)Saos-2細(xì)胞增殖的影響。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)hUC-MSCs和Saos-2細(xì)胞分泌的IL-6的量。Western-blot檢測(cè)IL-6、hUC-MSCs-CM及AG490對(duì)Saos-2細(xì)胞STAT3、p-STAT3蛋白的表達(dá)的影響,RT-PCR檢測(cè)PCNA、Cyclin D1、Survivin、STAT3基因的轉(zhuǎn)錄水平,細(xì)胞計(jì)數(shù)法和CCK-8檢測(cè)各組Saos-2細(xì)胞增殖能力的變化。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組Saos-2細(xì)胞遷移能力的變化及hUC-MSCs對(duì)Saos-2細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果:成功分離培養(yǎng)出成纖維樣貼壁細(xì)胞,細(xì)胞強(qiáng)陽性表達(dá)(97%)CD29、CD90、CD105,陰性表達(dá)(0.1%)CD19,具有成骨、成脂分化的能力。細(xì)胞計(jì)數(shù)和CCK-8檢測(cè)顯示hUC-MSCs和rh IL-6均能明顯促進(jìn)Saos-2細(xì)胞增殖,且不同濃度對(duì)Saos-2細(xì)胞的促增殖效果差異明顯(P0.05),呈現(xiàn)濃度依賴性。ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs-CM中IL-6濃度可達(dá)1804.8±152.2 ng/L(5×105 hUC-MSCs/m L*24 h),而同樣數(shù)量的Saos-2細(xì)胞分泌的IL-6濃度僅為170.1±22.5 ng/L。Western blot顯示AG490可明顯抑制Saos-2細(xì)胞STAT3的活化水平,hUC-MSCs-CM和rh IL-6均能激活STAT3,IL-6中和抗體則明顯削弱了hUC-MSCs-CM的激活作用。各組Saos-2細(xì)胞STAT3的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平均無明顯差異(P0.05)。hUC-MSCs-CM和rh IL-6均能上調(diào)Saos-2細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA、Cyclin D1、Survivin的表達(dá),用IL-6中和抗體或AG490抑制STAT3的活性后,各增殖相關(guān)基因的m RNA轉(zhuǎn)錄水平明顯下調(diào),細(xì)胞計(jì)數(shù)和CCK-8顯示各組Saos-2增殖能力的變化與基因表達(dá)水平一致。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示,hUC-MSCs具有向Saos-2細(xì)胞靶向遷移的能力;rh IL-6和hUC-MSC-CM均增強(qiáng)Saos-2細(xì)胞的遷移能力,于CM中加入IL-6中和抗體,細(xì)胞遷移能力明顯減弱,并低于對(duì)照組;CM+AG490組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)量明顯少于Control組及CM組。結(jié)論:(1)hUC-MSCs能向骨肉瘤細(xì)胞定向遷移并分泌大量的IL-6;(2)hUC-MSCs分泌的IL-6能通過激活骨肉瘤細(xì)胞的STAT3信號(hào)通路,上調(diào)PCNA、Cyclin D1、Surviving的表達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖;(3)hUC-MSCs分泌的IL-6能通過激活骨肉瘤細(xì)胞的STAT3信號(hào)通路促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞遷移。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1

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9 朱U，

本文編號(hào)：1150288