本文關(guān)鍵詞：Beclin1、lin28b在結(jié)直腸腺瘤中的表達(dá)

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【摘要】：目的:目前研究表明結(jié)直腸癌的發(fā)病率以及死亡率正日益增長(zhǎng),結(jié)直腸癌是消化道腫瘤中較常見的一種,在全球男性最常見癌癥中排第三位,女性中排第二位,2012年估計(jì)有136萬(wàn)新增病例[1],它也是世界第四大最常見的癌癥死亡原因(2008和2012),占所有癌癥死亡人數(shù)的8.5%,并且每年死亡數(shù)接近69萬(wàn)人[1]。結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未明確,一般認(rèn)為大部分的結(jié)直腸癌是來源于結(jié)直腸腺瘤,其中結(jié)直腸腺瘤可分為管狀腺瘤、混合性腺瘤、絨毛狀腺瘤,加強(qiáng)對(duì)結(jié)直腸腺瘤認(rèn)識(shí),對(duì)預(yù)防結(jié)直腸癌起到至關(guān)重要的作用。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展與多種因素有關(guān),結(jié)直腸粘膜上皮細(xì)胞癌變是多步驟、多階段及多基因參與的過程。此過程不僅涉及細(xì)胞過度增殖,并且與細(xì)胞凋亡有著密切的聯(lián)系。Beclin1與酵母自噬基因ATg6/Vps30是同源基因,1998年,Liang等[2]在對(duì)Sinbis病毒感染的致死性病毒性腦炎中發(fā)現(xiàn)一種新的60k Da的卷曲蛋白質(zhì),可以與bcl-2的基因產(chǎn)物bcl-2相互作用,它們將其命名為Beclin1,它位于人類染色體17q21并且可以編碼與凋亡控制蛋白bcl-2相互作用的蛋白。它是自噬過程中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子。此外,Beclin1與許多生物學(xué)途徑密切相關(guān),包括對(duì)壓力的適應(yīng),發(fā)育,胞吞,胞質(zhì)分裂,免疫,腫瘤的發(fā)生,老化及細(xì)胞凋亡。它的功能在多種機(jī)制中被檢測(cè)出,比如表觀遺傳沉默,micro RNA的調(diào)控,翻譯后修飾,蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用等。多種疾病與Beclin1的缺乏及功能異常有關(guān),這使它成為各種治療方法的一個(gè)潛在的有價(jià)值的靶向,包括抗癌治療。已有相關(guān)研究證實(shí)Beclin1在腫瘤的生長(zhǎng)中起到重要作用,但是機(jī)制仍不能明確,有的研究認(rèn)為它是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的自噬性死亡或者凋亡來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,或是通過預(yù)防腫瘤炎癥反應(yīng)及壞死反應(yīng)而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。其在宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌以及前列腺癌中表達(dá)下調(diào),并在這些癌癥組織中存在基因的缺失性突變。但在結(jié)腸癌中Beclin1高表達(dá),其在結(jié)腸癌組織中異常高表達(dá)的作用機(jī)制仍不十分明確。Lin28是一種RNA結(jié)合蛋白。Lin28b與Lin28是同源基因,Lin28與KLF4、SOX2、NANOG共同在體細(xì)胞中表達(dá)時(shí),可以將體細(xì)胞逆轉(zhuǎn)成多功能干細(xì)胞。Lin28和Lin28b都含有冷休克結(jié)構(gòu)域(cold shock domain,CSD)和一對(duì)反向的CCHC鋅指模體,這些結(jié)構(gòu)使得它能與RNA結(jié)合。Lin28阻斷l(xiāng)e-t 7家族mi RNA的加工處理,Lin28/let-7參與多種生物功能,包括腫瘤的發(fā)生,Lin28b通過阻斷l(xiāng)et-7通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生,激活Lin28b的表達(dá)還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)旨在通過對(duì)結(jié)直腸癌、結(jié)直腸管狀腺瘤、混合性腺瘤、絨毛狀腺瘤及正常結(jié)直腸粘膜中Beclin1及Lin28b的表達(dá)情況的研究,探討其在結(jié)直腸腺瘤發(fā)展過程中的作用及意義,以期為結(jié)直腸腫瘤的早期診斷及治療提供有利的理論依據(jù)。方法:收集2012年1月至2014年8月解放軍252醫(yī)院經(jīng)外科手術(shù)切除的結(jié)直腸癌100例及配對(duì)正常結(jié)直腸粘膜組織60例(亦稱為癌旁組織,取自手術(shù)切除殘端,距離癌組織至少5cm),100例結(jié)直腸癌患者術(shù)前均未接受化療、放療及靶向治療。消化內(nèi)鏡中心獲取100例結(jié)直腸腺瘤組織,其中包括結(jié)直腸管狀腺瘤30例,混合性結(jié)直腸腺瘤35例,絨毛狀結(jié)直腸腺瘤35例(所有組織均由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師審查及篩選)。將每次獲得的部分新鮮組織放入RNA保存液中后置于-20℃的冰箱中,用于進(jìn)行熒光定量PCR,另一部分放于10%的甲醛中固定、石蠟包埋、常規(guī)連續(xù)切片,然后進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。1 HE染色用于區(qū)分目標(biāo)組織的病理類型和分化程度。2應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)Beclin1及Lin28b的表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞中的定位及表達(dá)的強(qiáng)度。3利用熒光定量PCR的方法檢測(cè)Beclin1m RNA及Lin28bm RNA在組織中表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件的卡方檢驗(yàn)及單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:Beclin1和Lin28b染色的陽(yáng)性物質(zhì)為棕黃色,均表達(dá)于胞質(zhì)中。在結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸腺瘤組織、結(jié)直腸正常組織中Beclin1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為85%、73%、35%,三者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)直腸管狀腺瘤、結(jié)直腸混合性腺瘤、結(jié)直腸絨毛狀腺瘤中陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.3%、60%、82.9%,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果在不同類型的結(jié)直腸腺瘤中Beclin1的表達(dá)情況的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Beclin1的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、Dukes分期有關(guān)(P0.05),而與年齡及性別無(wú)關(guān)(P0.05)。在結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸腺瘤組織、結(jié)直腸正常組織中Lin28b的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80%、65%、30%,三者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在結(jié)直腸管狀腺瘤、結(jié)直腸混合性腺瘤、結(jié)直腸絨毛狀腺瘤中陽(yáng)性表達(dá)率分別為33.3%、65.7%、77.1%,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果在不同類型的結(jié)直腸腺瘤中Lin28b的表達(dá)情況的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Lin28b的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、Dukes分期有關(guān)(P0.05),而與年齡及性別無(wú)關(guān)(P0.05)。2熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果:應(yīng)用半定量的Taq Man PCR對(duì)所留取的結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸混合性腺瘤、結(jié)直腸管狀腺瘤、結(jié)直腸正常粘膜進(jìn)行檢測(cè),Beclin1 m RNA在組織中的表達(dá)量分別為8.196±0.760、5.680±1.178、3.898±0.520、3.566±0.625、0.312±0.419,在上述組織中的表達(dá)量依次降低,F=75.11074,P0.05。SNK多重比較結(jié)果顯示任兩組間總體均數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Lin28b m RNA在結(jié)直腸癌組織、結(jié)直腸絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸混合性腺瘤、結(jié)直腸管狀腺瘤、結(jié)直腸正常粘膜組織中的表達(dá)量分別為17.994±2.044、11.080±0.947、7.232±1.580、3.966±0.833、1.656±0.740,在上述組織中的表達(dá)量依次降低,F=117.5025,P0.05。SNK多重比較結(jié)果顯示任兩組間總體均數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:無(wú)論是Beclin1還是Lin28b在結(jié)直腸癌組織中均高表達(dá),在正常粘膜中低表達(dá),并在腺瘤組織中隨著絨毛含量的增加表達(dá)量也隨之增加,在結(jié)直腸癌組織中兩者均表達(dá)最強(qiáng),提示兩者均可能參加結(jié)直腸腺瘤向結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)變過程,可能成為預(yù)測(cè)結(jié)直腸腺瘤癌變的重要指標(biāo),同時(shí)也為結(jié)直腸癌的靶向治療提供了分子生物學(xué)的依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 高金雪;吳清明;劉丹;;大腸癌組織自噬相關(guān)蛋白Beclin1表達(dá)意義Meta分析[J];中華腫瘤防治雜志;2017年04期

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本文編號(hào)：1147874