本文關(guān)鍵詞：EZH2和H3K27me3在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲能力的影響

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【摘要】：食管癌(Esophageal carcinoma,EC)是世界上最常見(jiàn)的癌癥類型之一。食管鱗狀細(xì)胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)和腺癌(Esophageal Adenocarcinoma,EA)是食管癌最常見(jiàn)的兩種類型。西方國(guó)家食管腺癌較多,而在中國(guó)食管鱗狀細(xì)胞是其中最主要的組織學(xué)類型。盡管在治療食管鱗狀細(xì)胞癌方面,外科手術(shù)、放療及化療已經(jīng)取得的很大的進(jìn)步,但是食管鱗狀細(xì)胞癌患者五年生存率仍不理想。晚期食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后較差生活質(zhì)量較低。因此,迫切的需要一個(gè)可靠的生物標(biāo)志物來(lái)識(shí)別伴有高度不良預(yù)后的患者,并且指導(dǎo)其治療。已經(jīng)報(bào)道表觀遺傳改變,包括DNA甲基化及組蛋白共價(jià)修飾,涉及各種腫瘤基因的沉默,促進(jìn)腫瘤發(fā)生或者人類癌癥的進(jìn)展。其中最重要的機(jī)制是通過(guò)EZH2沉默許多癌癥相關(guān)基因,EZH2可以使靶基因啟動(dòng)子處組蛋白H3賴氨酸K27發(fā)生三甲基化。本研究利用免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)EZH2及H3K27me3在食管鱗癌組織和相應(yīng)正常食管組織中的表達(dá)及與其臨床生物學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系,及與患者預(yù)后關(guān)系。并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western-blot方法檢測(cè)EZH2及H3K27me3在食管癌細(xì)胞系中的表達(dá),并通過(guò)Transwell侵襲小室及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)探討了EZH2對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響,以期為EZH2及H3K27me3作為判斷患者不良預(yù)后的指標(biāo)提供理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:第一部分EZH2和H3K27me3在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的意義目的:探討EZH2和H3K27me3在食管鱗狀細(xì)胞癌組織,相應(yīng)正常組織中的表達(dá)及與其臨床生物學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系,尤其是與預(yù)后關(guān)系。方法:1實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)96對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌及其癌旁組織中EZH2 m RNA的表達(dá)。2應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)96例食管鱗狀細(xì)胞癌組織及相應(yīng)正常組織中EZH2和H3K27me3蛋白的表達(dá),分析其與患者臨床生物學(xué)指標(biāo)及其預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:1食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本EZH2 m RNA水平明顯高于癌旁組織。96例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中EZH2的陽(yáng)性率為84.4%(81/96);而相應(yīng)癌旁組織中EZH2高表達(dá)占51.0%(49/96)。2 EZH2和H3K27me3蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于癌旁組織。在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中,EZH2在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá),但是H3K27me3則僅表達(dá)在細(xì)胞核中。EZH2和H3K27me3在食管鱗狀細(xì)胞癌癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性率分別占44.8%(43/96)和26.0%(25/96),低于食管鱗狀細(xì)胞癌組織70.8%(68/96)和47.9%(46/96)。3 EZH2和H3K27me3表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者病理學(xué)特征的關(guān)系。EZH2蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤部位及腫瘤分期不相關(guān)(P?0.05)。EZH2蛋白的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P0.05)。H3K27me3蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤部位、及腫瘤分期無(wú)關(guān)(P?0.05)。H3K27me3蛋白表達(dá)與食管癌患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P0.05)。4 EZH2和H3K27me3表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者總生存期間的關(guān)系。Kaplan-Meier生存數(shù)據(jù)顯示EZH2表達(dá)陽(yáng)性患者的平均生存期41.175個(gè)月,明顯短于EZH2表達(dá)陰性患者(54.166個(gè)月)(χ2=13.218,P=0.000)。同樣,H3K27me3表達(dá)陽(yáng)性的患者平均生存期38.677個(gè)月,明顯短于H3K27me3表達(dá)陰性患者(50.800個(gè)月)(χ2=15.990,P=0.000)。EZH2和H3K27me3表達(dá)均陽(yáng)性的患者平均生存期為36.136個(gè)月,明顯短于僅有一種蛋白陽(yáng)性患者(48.027個(gè)月)或者兩個(gè)蛋白均陰性患者(55.627個(gè)月)。5 Cox回歸分析數(shù)據(jù)表明EZH2表達(dá)(HR,3.574;95%CI,1.742-7.331;P=0.001)、組織學(xué)分級(jí)(HR,2.042;95%CI,1.200-3.475;P=0.008)及淋巴結(jié)遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移(HR,8.667;95%CI,4.280-17.547;P?0.001)是影響食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素。盡管H3K27me3并沒(méi)有顯示出是影響食管鱗狀細(xì)胞癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素,但是共表達(dá)EZH2和H3K27me3與食管鱗狀細(xì)胞癌患者遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(χ2=15.681;P=0.000)。結(jié)論:EZH2和H3K27me3可以作為食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后不良的生物標(biāo)志物。第二部分EZH2和H3K27me3在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲能力的影響目的:檢測(cè)食管癌細(xì)胞株KYSE30、KYSE170、TE1、Eca109細(xì)胞中EZH2的表達(dá),并通過(guò)轉(zhuǎn)染EZH2過(guò)表達(dá)載體或sh EZH2載體研究EZH2與H3K27me3的關(guān)系及對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲能力的影響。方法:1應(yīng)用qRT-PCR、Western Blot方法檢測(cè)食管癌細(xì)胞株KYSE30、KYSE170、TE1、Eca109中EZH2的表達(dá)情況。2應(yīng)用qRT-PCR、Western Blot方法檢測(cè)食管癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)/沉默EZH2對(duì)H3K27me3基因表達(dá)水平的影響。3應(yīng)用qRT-PCR分析食管癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)/沉默EZH2對(duì)MMP1、MMP2、MMP7及MMP9基因表達(dá)水平的影響。4通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)分析過(guò)表達(dá)/沉默EZH2后食管癌細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力。5通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)分析過(guò)表達(dá)/沉默EZH2后食管癌細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果:1 qRT-PCR及Western Blot結(jié)果顯示Eca109及TE1細(xì)胞中EZH2和H3K27me3明顯高于KYSE30及KYSE170細(xì)胞中EZH2和H3K27me3表達(dá)水平(P0.05)。2 Western Blot結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)EZH2質(zhì)粒的KYSE30和KYSE170食管癌細(xì)胞系中H3K27me3蛋白的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P0.05)。3 Western Blot結(jié)果顯示EZH2沉默組的Eca109及TE1食管癌細(xì)胞系中H3K27me3蛋白的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P0.05)。4 qRT-PCR結(jié)果顯示KYSE30和KYSE170食管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染EZH2后MMP1、MMP2、MMP7及MMP9 m RNA水平較對(duì)照組相比明顯升高(P0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示KYSE30及KYSE170轉(zhuǎn)染EZH2組侵襲能力顯著高于對(duì)照組(P0.05)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示與對(duì)照組相比轉(zhuǎn)染EZH2組KYSE30及KYSE170細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)(P0.05)。5 qRT-PCR結(jié)果顯示Sh EZH2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Eca109和TE1食管癌細(xì)胞系后MMP1、MMP2、MMP7及MMP9 m RNA水平較對(duì)照組相比明顯降低(P0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明Eca109和TE1細(xì)胞轉(zhuǎn)染Sh EZH2質(zhì)粒組穿過(guò)Transwell侵襲小室細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組細(xì)胞數(shù)(P0.05)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示與對(duì)照組相比轉(zhuǎn)染Sh EZH2質(zhì)粒組Eca109和TE1細(xì)胞遷移能力明顯降低(P0.05)。結(jié)論:EZH2可增加靶基因啟動(dòng)子上組蛋白H3第27位賴氨酸的三甲基化,并且EZH2促進(jìn)了食管癌細(xì)胞的侵襲能力。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Sima Besharat;Ali Jabbari;Shahryar Semnani;Abbasali Keshtkar;Jeran Marjani;;Inoperable esophageal cancer and outcome of palliative care[J];World Journal of Gastroenterology;2008年23期

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本文編號(hào)：1146581