本文關(guān)鍵詞：基于適配體特異性作用的乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物同時檢測的新方法研究

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【摘要】：癌癥是全世界首要的死亡因素,全世界每年有幾百萬人死于癌癥疾病。腫瘤疾病的早期診斷是癌癥病人存活的關(guān)鍵因素。腫瘤細(xì)胞表面腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)種類、表達(dá)水平及其構(gòu)型的變化,是惡性腫瘤早期診斷、分類、預(yù)后判斷以及治療的重要指標(biāo)。尤其是腫瘤蛋白的異常表達(dá)與細(xì)胞的惡化和突變緊密關(guān)聯(lián)。對腫瘤細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行同時檢測,不僅能夠大幅提高檢測的正確率,更有助于闡明腫瘤標(biāo)記物在細(xì)胞癌變過程中的作用。本論文旨在建立一種針對乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤蛋白的熒光檢測方法,為乳腺癌疾病的臨床診斷提供高靈敏、高準(zhǔn)確性的細(xì)胞水平的檢測方法。該方法不僅實現(xiàn)了乳腺癌細(xì)胞表面多腫瘤蛋白的同時檢測,還能對不同類型的乳腺癌細(xì)胞加以區(qū)分,在與腫瘤蛋白相關(guān)的癌癥早期診斷中有潛在的應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下：設(shè)計了一種可激活的適配體探針分子,利用其與目標(biāo)蛋白結(jié)合前后熒光信號的改變實現(xiàn)了癌細(xì)胞表面多種腫瘤蛋白的同時檢測。該探針分子由識別序列和修飾序列兩部分組成,其識別部分為能與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的適配體序列,我們在其兩端分別修飾了完全互補的堿基序列(即修飾序列),使探針分子表現(xiàn)為莖環(huán)狀,并在其5'端標(biāo)記熒光發(fā)光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針分子與細(xì)胞作用前,由于熒光發(fā)光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)靠得很近,發(fā)生了熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)而熒光淬滅。因此,探針分子本身幾乎檢測不到熒光信號。而當(dāng)探針分子與細(xì)胞作用后,其莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)被打開,造成熒光基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán),熒光信號恢復(fù)。我們通過設(shè)計不同的可激活適配體探針并對其分別標(biāo)記熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán),實現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)多種腫瘤相關(guān)蛋白的同時檢測。根據(jù)可激活適配體探針熒光信號的恢復(fù)達(dá)到乳腺癌MCF-7細(xì)胞的高靈敏檢測,其靈敏度可以低達(dá)每毫升10個細(xì)胞。該方法的優(yōu)勢在于所設(shè)計的可激活的適配體探針有效避免了背景信號的干擾,大幅度地提高了檢測的靈敏度�？杉せ畹倪m配體探針不與血液中非目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生作用進(jìn)一步揭示了該探針與目標(biāo)細(xì)胞的特異性結(jié)合。另外,用三種不同的可激活的適配體探針與不同的乳腺癌細(xì)胞作用,通過檢測三種腫瘤相關(guān)蛋白在各個細(xì)胞表面的表達(dá)水平,對不同型別乳腺癌細(xì)胞做出了區(qū)分。可見,該檢測方法對乳腺癌疾病的早期診斷有潛在的應(yīng)用價值。
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 左衍海;施鑫;;惡性腫瘤轉(zhuǎn)移機制研究新進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2008年03期

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本文編號：1142875