本文關(guān)鍵詞：靶向于前列腺癌的載阿霉素納米泡的構(gòu)建及其體外治療效能評(píng)估

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【摘要】：背景目前,前列腺癌發(fā)展成為我國(guó)男性高發(fā)的惡性腫瘤。雖然大部分前列腺癌對(duì)抗雄激素治療都有效,但是絕大多數(shù)會(huì)在雄激素治療過程中發(fā)展為雄激素非依賴性前列腺癌(androgenic independent prostate cancer,AIPC)。而目前針對(duì)AIPC的治療方法和手段較少[1]。相關(guān)研究顯示,由于腫瘤新生血管基底膜不完整,內(nèi)皮間隙寬[2],納米級(jí)超聲造影劑微泡的粒徑小,能穿過腫瘤血管,達(dá)到腫瘤實(shí)質(zhì),實(shí)現(xiàn)腫瘤組織特異性分子顯像[3]。前列腺特異性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)是前列腺癌細(xì)胞膜抗原[4],尤其常表達(dá)于前列腺轉(zhuǎn)移性癌和AIPC中,已經(jīng)成為前列腺癌的靶向診斷和治療研究的熱點(diǎn)。廣譜抗腫瘤藥物阿霉素(doxorubicin,DOX)有良好的殺傷腫瘤細(xì)胞的作用,但對(duì)正常細(xì)胞也有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性,對(duì)機(jī)體有明顯的毒副作用。如何在降低阿霉素副作用的情況下達(dá)到有效治療腫瘤的作用一直是目前腫瘤靶向治療研究的難點(diǎn)[5]。我們前期已制備出攜帶PSMA單克隆抗體的納米級(jí)超聲造影劑,且在能前列腺癌中靶向特異性顯像。因此,本研究擬結(jié)合我們前期的研究結(jié)果及相關(guān)研究進(jìn)展,構(gòu)建一種攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡,在實(shí)現(xiàn)前列腺癌的特異性超聲分子顯像的同時(shí),用超聲波擊破靶向載藥納米泡,釋放出阿霉素,使阿霉素在腫瘤局部組織內(nèi)濃度增高,達(dá)到靶向治療前列腺癌的目的,為前列腺癌的診斷治療提供一種新的思路和方法。目的制備靶向于前列腺癌的攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡,觀察靶向載藥納米泡的基本特性和與前列腺癌AIPC細(xì)胞靶向結(jié)合的能力,對(duì)其體內(nèi)顯像能力和體外對(duì)前列腺癌細(xì)胞殺傷的效果及其機(jī)制進(jìn)行研究和評(píng)估。材料和方法應(yīng)用機(jī)械震蕩法制備載阿霉素的納米泡,利用生物素-鏈霉素法制備攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡。用熒光顯微鏡觀察納米泡和阿霉素連接情況,用熒光顯微鏡觀察納米泡和PSMA單克隆抗體偶聯(lián)的情況。用光鏡和透射電鏡觀察靶向載藥納米泡形態(tài)大小。用粒徑檢測(cè)儀檢測(cè)其粒徑和電位。用酶標(biāo)儀檢測(cè)其載阿霉素濃度。在超聲治療儀不同輻照強(qiáng)度和時(shí)間條件下輻照靶向載藥納米泡,探究最佳輻照強(qiáng)度和時(shí)間。在超聲波治療儀最適輻照條件下檢測(cè)其藥物釋放率。將靶向載藥納米泡與臨床用微米級(jí)聲學(xué)造影劑對(duì)比研究,觀察二者在小鼠肝臟和腎臟上的增強(qiáng)造影效果。最后用光鏡觀察靶向載藥納米泡與前列腺癌細(xì)胞的結(jié)合情況,在此基礎(chǔ)上研究靶向載藥納米泡在體外的治療效果,并在掃描電鏡下觀察超聲輻照后靶向載藥納米泡對(duì)前列腺癌細(xì)胞的作用。結(jié)果攜載PSMA單克隆抗體的靶向載藥納米泡在光鏡下大小適中、分布均勻;載藥納米泡的脂質(zhì)外殼在熒光顯微鏡下顯示為阿霉素發(fā)出的紅色熒光;FITC標(biāo)記的二抗與靶向載藥納米泡結(jié)合后,靶向納米泡表面顯示為綠色熒光。靶向載藥納米泡平均粒徑為(793.80±92.05)nm,電位為(8.74±2.41)m V。酶標(biāo)儀測(cè)量納米泡載阿霉素的濃度為(1.18±0.11)mg/ml。超聲治療儀的最適輻照強(qiáng)度和時(shí)間為1.0 W/cm2和18s。在超聲波治療儀輻照下,阿霉素的釋放率為(48.65±3.99)%。靶向載藥納米泡在小白鼠肝臟和腎臟顯影的達(dá)峰時(shí)間遲于微米級(jí)聲學(xué)造影劑、上升時(shí)間和持續(xù)顯影時(shí)間均長(zhǎng)于臨床用微米級(jí)聲學(xué)造影劑,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而兩者的峰值強(qiáng)度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。靶向載藥納米泡可特異性地粘附在表達(dá)PSMA的前列腺癌C4-2細(xì)胞表面,與不表達(dá)PSMA的前列腺癌細(xì)胞PC-3和胃癌細(xì)胞MKN45不粘附結(jié)合。相同超聲輻照條件下,靶向載藥納米泡對(duì)C4-2細(xì)胞和PC-3細(xì)胞的殺滅作用明顯強(qiáng)于單純藥物組、空白納米泡組、靶向納米泡組、空白組,但與載藥納米泡組差別不明顯。應(yīng)用掃描電鏡進(jìn)一步觀察到,超聲輻照靶向載藥納米泡組的C4-2細(xì)胞表面不平,有孔道生成,而超聲輻照單純C4-2組的細(xì)胞表面光滑,無孔道生成。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功制備了性質(zhì)穩(wěn)定的攜載PSMA單克隆抗體載藥納米泡,且證實(shí)納米泡表面成功連接有PSMA單克隆抗體,阿霉素均勻分布在納米泡的脂質(zhì)外殼中。其在體內(nèi)有較好的顯影效果,且在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí),其能靶向地與表達(dá)PSMA的前列腺癌細(xì)胞表面結(jié)合,并能有效地破壞殺傷前列腺癌細(xì)胞和抑制其生長(zhǎng),為今后應(yīng)用靶向納米泡作為化療藥物載體,靶向治療前列腺癌提供了研究基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 常詩卉;陳曉瑞;菅喜岐;;高強(qiáng)度聚焦超聲腫瘤治療焦域的仿真研究[J];生物物理學(xué)報(bào);2013年01期

2 張鐵紅;杜賈軍;郭文彬;劉奇;;超聲聯(lián)合微泡劑介導(dǎo)的腫瘤靶向治療研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2011年11期

3 王冬;譚開彬;楊珂;錢頻;鄭嘉榮;;納米級(jí)超聲微泡造影劑的制備及其性狀的初步研究[J];臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志;2007年12期

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本文編號(hào)：1142107