發(fā)布時(shí)間：2017-11-05 01:03

  本文關(guān)鍵詞：miR-197與胃癌相關(guān)炎性基因IL-1F5的關(guān)系及功能研究

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【摘要】：目的Micro RNA與幽門(mén)螺桿菌感染所致的炎癥密切相關(guān),而幽門(mén)螺桿菌感染是胃癌的重要發(fā)病原因。Micro RNA可通過(guò)與相關(guān)炎性靶基因3’-UTR區(qū)結(jié)合,調(diào)控炎性基因,影響炎性通路的活化及炎性因子的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控和參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的多種病理過(guò)程。IL-1家族是一類(lèi)重要的炎性細(xì)胞因子,但目前,對(duì)IL-1F5的研究相對(duì)較少,尤其是與胃癌相關(guān)的研究。通過(guò)靶基因預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)在IL-1F5的3’-UTR區(qū)可能存在mi R-197的靶結(jié)合位點(diǎn),本研究主要對(duì)預(yù)測(cè)出的mi R-197與胃癌相關(guān)慢性炎性基因IL-1F5的靶關(guān)系及功能進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法根據(jù)靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果及本課題組前期對(duì)IL-1F5的3’-UTR區(qū)SNP與胃癌易感性關(guān)系的研究,人工構(gòu)建mi R-197的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體p Genesil-1-mi R-197,并與p Genesil-1、mi R-197抑制物和mi RNA抑制物對(duì)照共同轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823,分別提取各組細(xì)胞總RNA和總蛋白。然后,利用q RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)各組mi R-197和內(nèi)參U6,IL-1F5和內(nèi)參GAPDH的表達(dá)量,Western Blot技術(shù)檢測(cè)IL-1F5和內(nèi)參GAPDH蛋白的表達(dá)量;并對(duì)各組的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行t檢驗(yàn)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)三次,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS21.0。結(jié)果(1)mi R-197的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體p Genesil-1-mi R-197經(jīng)單雙酶切鑒定發(fā)現(xiàn)酶切片段大小一致,測(cè)序結(jié)果序列對(duì)比分析一致,載體構(gòu)建成功。(2)人胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823中,重組質(zhì)粒p Genesil-1-mi R-197組與質(zhì)粒p Genesil-1組mi R-197的相對(duì)表達(dá)量分別為3.55±0.032和0.77±0.072,3.07±0.056和0.94±0.030(P值均0.001);mi R-197抑制物組與抑制物對(duì)照組mi R-197的相對(duì)表達(dá)量分別為0.33±0.025和0.59±0.069(P=0.003),0.62±0.035和0.84±0.015(P=0.001);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重組質(zhì)粒p Genesil-1-mi R-197組與質(zhì)粒p Genesil-1組IL-1F5的相對(duì)表達(dá)量分別為0.26±0.051和0.39±0.042(P=0.033),1.01±0.087和1.37±0.10(P=0.01);mi R-197抑制物組與抑制物對(duì)照組IL-1F5的相對(duì)表達(dá)量分別為3.23±0.098和0.72±0.063(P0.001),2.94±0.17和1.97±0.061(P=0.001);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)人胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823中,重組質(zhì)粒p Genesil-1-mi R-197組與質(zhì)粒p Genesil-1組IL-1F5蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為0.09±0.025和0.30±0.103(P0.001),0.18±0.004和0.48±0.013(P0.001),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;mi R-197抑制物組與抑制物對(duì)照組IL-1F5蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為0.46±0.025和0.38±0.013(P=0.006),0.65±0.021和0.38±0.027(P0.001),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論重組質(zhì)粒p Genesil-1-mi R-197構(gòu)建及轉(zhuǎn)染成功,且轉(zhuǎn)染后上調(diào)了mi R-197在人胃癌細(xì)胞系SGC-7901和BGC-823中的表達(dá)。重組質(zhì)粒p Genesil-1-mi R-197轉(zhuǎn)染后下調(diào)了IL-1F5在SGC-7901和BGC-823中的表達(dá)水平,mi R-197抑制物上調(diào)了IL-1F5在SGC-7901和BGC-823中的表達(dá)水平。IL-1F5可能是mi R-197的靶基因,且mi R-197負(fù)性調(diào)節(jié)IL-1F5的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 尹瑩;胃癌前病變癌變的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)：外周血微小RNA預(yù)警模型的建立及其應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1141890